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接觸霉變玉米后女子肺部長滿黃曲霉菌,毒性*的黃曲霉毒素該如何鑒別?

來源:??萍瘓F股份有限公司   2021年12月09日 09:48  

12月8日早間,“女子接觸霉變玉米后肺部長滿真菌”沖上熱搜第一。據(jù)人民網(wǎng),一23歲女子前段時間回老家?guī)兔κ沼衩?,事后連續(xù)1個多月咳喘不止。經(jīng)醫(yī)生檢查,她的肺部長滿了黃曲霉菌,引發(fā)了真菌感染。該女子回憶,當時她在無防護措施情況下收玉米,有些玉米可能淋雨霉壞。[1]

什么是黃曲霉毒素?

黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。當糧食未能及時曬干及儲藏不當時,往往容易被黃曲霉或寄生曲霉污染而產(chǎn)生此類毒素。在各類食品中,花生、花生油、玉米污染最嚴重。黃曲霉毒素是一種劇毒的致肝癌物質(zhì),人攝入大劑量的黃曲霉毒素后可出現(xiàn)肝實質(zhì)細胞壞死、膽管上皮細胞增生、肝脂肪浸潤及肝出血等急性病變。


事實上,世界范圍內(nèi)有多次黃曲霉毒素急性中毒事件,非洲的霉木薯餅中毒,印度的霉玉米中毒,肯尼亞黃曲霉玉米污染事件……所以把食物中的黃曲霉毒素控制在安全值以內(nèi),也是各國都在嚴格把關(guān)不敢松懈的事兒。[2]



怎么鑒別食物中是否黃曲霉毒素超標?

首先是快速識別,黃曲霉毒素是很苦的,食用花生、核桃等食物時如果感覺很苦,馬上吐出來,并漱口。


此外,睿科集團建立了Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀測定玉米、大米和花生油中黃曲霉毒素B族和G族的分析方法,供廣大食品檢測客戶參考。試樣經(jīng)過70%甲醇水溶液提取,提取液經(jīng)離心、稀釋后用含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱自動凈化。用20mL水淋洗柱子將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去,以甲醇洗脫免疫親和柱。將洗脫液在50℃條件下氮吹干,用1mL初始流動相定容,經(jīng)高效液相色譜儀上機分析。

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圖-1.4種黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)式

下文參考GB5009.22-2016《食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中第三法,采用免疫親和柱凈化,高效液相色譜檢測,建立了復(fù)雜糧油樣品基質(zhì)中黃曲霉毒素高靈敏度的前處理和分析方法,得到四種常見糧油樣品中黃曲霉毒素的加標回收率在83-100%之間,RSD值小于5%。

1.標準曲線配置

使用??艫uto Prep 200全自動液體樣品處理工作站可實現(xiàn)標準品的全自動化配置,可將購買的混合標液(1000ug/L)通過工作站的直接稀釋模式,配置成濃度為10ug/L的工作中間液,緊接著可通過程序設(shè)置,吸取該工作液,配置一條濃度分別為0.5ug/L,2.0ug/L,5.0ug/L,25ug/L和100ug/L的標準工作曲線。

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圖-2. Auto Prep 200 液體工作站配標程序

2.樣品提取與前處理

花生油樣品前處理

準確稱取5g花生油樣品于50mL離心管中,加入20mL甲醇-水溶液(7:3)(v/v),渦旋震蕩提取20min,以7000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min,取4mL上清液于80mL玻璃上樣管中,加入23mL 0.1%吐溫-20的PBS緩沖液混勻,待用。

(此處以花生油樣品前處理為例,玉米粉、大米樣品操作步驟同上)


固相萃取凈化條件

全自動固相萃取儀
Fotector Plus
固相萃取柱
黃曲霉毒素免疫親和柱
(Romer,60 mg/3 mL)
淋洗
超純水
洗脫
甲醇

表-1 固相萃取凈化條件

以2mL/min的速度精確上樣27 mL待測液,10mL水潤洗樣品瓶,10mL水淋洗免疫親和柱,氣推30mL吹干免疫親和柱,推速為80mL/min。最后用2mL甲醇以0.5mL/min的速度洗脫樣品,收集洗脫液用??艫uto EVA-60全自動平行濃縮儀于50°C、2psi條件下氮吹干,用初始流動相定容至1mL,過濾膜上機分析。詳細步驟見圖-3。

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圖-3. Fotector Plus 黃曲霉毒素免疫親和凈化方法

3.樣品測試

油樣加標測試

取空白花生油樣5g,添加2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的標準品,進行上述步驟的前處理凈化,樣品回收率如下表-2所示:

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表-2添加水平為2ug/kg花生油樣的回收率

大米樣品加標測試

大米中添加水平為2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率結(jié)果:

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表-3添加水平為2ug/kg大米的回收率結(jié)果

玉米樣品加標測試

玉米中添加水平為2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率結(jié)果:

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表-4添加水平為2ug/kg玉米的回收率結(jié)果

4.注意事項

由于黃曲霉毒素在紫外光照射下不穩(wěn)定,因此在實驗過程中應(yīng)該避免紫外光和太陽光的照射。

谷物中離心完成后,不可放置過長時間,否則谷物容易重新吸水,可能導(dǎo)致提取液的濃度過高,使樣品的回收率偏高,影響測試結(jié)果。

固相萃取進行提取液凈化前,特別對于偏酸或偏堿性樣品,應(yīng)用PBS緩沖溶液(pH=7.4)進行稀釋后上機,否則可能會導(dǎo)致回收率偏低。

5.總結(jié)

標液配制

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凈化

濃縮

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本文采用Auto Prep 200全自動液體樣品處理工作站可實現(xiàn)混標、標準曲線的配置,全程無需人為值守,讓實驗人員遠離有毒有害特別是黃曲霉毒素這樣的劇毒化學物質(zhì),保護身體健康。

Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀能同步凈化6個樣品,連續(xù)自動處理60個樣品,做樣通量高;同時可無人值守,減少工作量。此外還可避免工作人員因操作失誤導(dǎo)致的檢測偏差,以及將實驗人員更迭對檢測結(jié)果的影響最小化。

Auto EVA-60全自動平行濃縮儀處理通量高,60個樣品可同時進行氮吹,實驗平行性好;采用氮吹針自動追隨液面的設(shè)計,無需手動調(diào)節(jié)氮吹針且耗氣量小,省時省力。

本解決方案快速高效,且無需人員值守,讓實驗人員遠離黃曲霉毒素等有害化學物質(zhì)且提供工作效率。


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參考資料:

[1]《熱搜第一!女子接觸霉變玉米后肺部長滿黃曲霉菌,什么是黃曲霉毒素,它有哪些危害?》人民網(wǎng)人民數(shù)據(jù)

[2]《“食藥安全 科學生活”食品篇之黃曲霉毒素的前世今生》廣州市黃埔區(qū)人民政府


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