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重組IgG制備

來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年12月13日 15:05  

隨著重組蛋白技術的進一步完善,真核哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng)憑著蛋白折疊和完善的翻譯后休息系統(tǒng),表達的抗體更接近天然構象,從而具有和天然抗體相同的生物活性,因此常用于功能蛋白、抗體及臨床疫苗的生產(chǎn)。艾柏森生物提供工業(yè)級別重組IgG、Fab和ScFv等抗體片段的制備和純化服務。

瞬時轉染表達

瞬時轉染(transienttransfection)是將重組抗體基因導入真核細胞的方式之一。在瞬時轉染中,重組DNA導入感染性強的細胞系以獲得目的基因暫時但高水平的表達。轉染的DNA不必整合到宿主染色體,可在比穩(wěn)定轉染較短時間內(nèi)收獲轉染的細胞,并對溶解產(chǎn)物中目的基因的表達進行檢測。艾柏森提供從基因優(yōu)化、載體構建、瞬轉HEK293細胞/CHO細胞、表達純化小試以及大規(guī)模發(fā)酵服務??梢远虝r間內(nèi)生產(chǎn)mg至g級重組IgG。

構建穩(wěn)定細胞系

構建目的基因的表達質粒后,可通過電轉、慢病毒轉染等方法,將質粒轉染至宿主細胞。選用DHFR /GS基因表達系統(tǒng),將轉染的細胞培養(yǎng)在合適的選擇性培養(yǎng)基中,然后進行MTX/MSX壓力篩選,以產(chǎn)生穩(wěn)定細胞庫。

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艾柏森生物使用MolecularClonePix2系統(tǒng),高通量、自動化的篩選出100-200個高水平分泌克隆,并從中挑選最佳10-20個高產(chǎn)克隆,進行下一步的穩(wěn)定性測試。我們挑選出*的10個克隆,進行10次傳代后,qPCR和WB法檢測細胞株的穩(wěn)定性。我們提供序列及載體報告, 3株表達zuihao的細胞株,表達分析、穩(wěn)定性測試報告以及詳細的穩(wěn)定細胞株構建報告。




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