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雙抗和胰酶的使用方法

來源:蒂科(上海)生物科技有限公司   2021年12月14日 09:54  

雙抗

一、什么是雙抗?

青霉素加上鏈霉素,俗稱“雙抗”。


二、培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎?

加不加雙抗不是絕對的,視實際情況而定。

如果你實驗室條件足夠好,如果你操作足夠規(guī)范,就盡量不要加雙抗了。

相反,如果你實驗條件不夠,操作也沒有絕對把握,還是加的好。

好的方法是做個實驗對照,看有沒有必要加雙抗。


三、如何加雙抗?

加在DMEM里,因為如果是直接在換液傳代滴加的話,那個雙抗的濃度實在不好控制,如果加多了話對細胞毒性太大,如果擔(dān)心時效,可以Z在培養(yǎng)液配好后分裝于100ml的小玻璃瓶中,在每啟用一瓶之前加,加了之后應(yīng)盡快用完。


胰酶

一、胰酶使用的時候要注意什么?

1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。

2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。


二、以貼壁細胞的消化為例:

1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清;

2、加入少量胰酶細胞消化液,略蓋過細胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細胞消化時間有所不同)

3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。

4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。


如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。


常用的細胞消化液為胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)(如細胞外基質(zhì))水解,改變細胞間的連接,使組織或細胞片分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。


影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時間及溫度等)、消化時的溫度(氣溫、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等 。


加入胰蛋白酶-EDTA溶液,視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),以使充分浸潤;


一般消化時間約為1至3分鐘,肉眼觀察瓶底由半透明(細胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為透明、點狀(出現(xiàn)細小空隙)時,棄去細胞消化液,或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化,吹打分散;如見大量細胞片狀脫落,已消化過頭,則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作。(消化過頭,可造成大量細胞從瓶壁上脫下,甚至造成細胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑,所以加入*培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。

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