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如何避免ELISA實(shí)驗(yàn)中的基質(zhì)效應(yīng)？
在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，我們經(jīng)常會(huì)遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度，容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。
什么是基質(zhì)效應(yīng)呢?
首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)。這是ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的雷。
如何判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢?
當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是實(shí)驗(yàn)操作出現(xiàn)問(wèn)題，這時(shí)應(yīng)增加重復(fù)，進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時(shí)，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改?；|(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無(wú)法計(jì)算出數(shù)值，或許數(shù)值為負(fù)。
雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
第一種方法是采用線性稀釋?zhuān)话銇?lái)講，抗原和捕獲抗體、檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。
第二種方法是摻入回收率實(shí)驗(yàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)?；厥章式橛?0-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。
那我們?nèi)绾伪苊釫LISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)?
基質(zhì)效應(yīng)可以通過(guò)產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。
相關(guān)產(chǎn)品
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