出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下:
1.解凍過程中細胞裂解
推薦的解決方案:可預期到一定量的細胞死亡,因此細胞的濃度應足夠高,考慮到這一損失。起始濃度為106至107細胞/毫升。
2.解凍過程中的問題
推薦的解決方案:在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物,保存時間為1-5天,但這不是保存的優(yōu)先方法。在37℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)。
3.對冷凍液過敏
推薦的解決方案:
A.*或部分更換培養(yǎng)基,減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。
B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物,取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數或在生長階段中的位置。冷凍的最佳條件在對數期。
4.被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養(yǎng)物的年齡
推薦的解決方案:解凍最近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態(tài)的時間越長,存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數期。
出現(xiàn)大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下:
1.冷凍時細胞密度過低
推薦的解決方案:縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后,立即將凍存管浸入在37℃的水浴中,并震蕩至全部融化,然后迅速地轉移到預熱的培養(yǎng)基中。
2.不適當的冷凍過程
推薦的解決方案:解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當的技術,并確保使用了適量和適合的冷凍液。
出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下:
1.培養(yǎng)瓶的大小
推薦的解決方案:一些細胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉移到較小的培養(yǎng)瓶中,使細胞密度上升;如,根據培養(yǎng)基的體積,從75cm2的燒瓶轉移到2或3個25cm2的燒瓶中。
2.細胞密度過低
推薦的解決方案:提高未來冷凍物種細胞的凍存密度,或使用較小的培養(yǎng)容器,或解凍多個試管來進行培養(yǎng)。
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