出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下:
1.解凍過程中細(xì)胞裂解
推薦的解決方案:可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡,因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高,考慮到這一損失。起始濃度為106至107細(xì)胞/毫升。
2.解凍過程中的問題
推薦的解決方案:在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物,保存時(shí)間為1-5天,但這不是保存的優(yōu)先方法。在37℃充分解凍后應(yīng)立即開始培養(yǎng)。
3.對(duì)冷凍液過敏
推薦的解決方案:
A.*或部分更換培養(yǎng)基,減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時(shí)后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。
B.留出更多時(shí)間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時(shí)細(xì)胞需要幾周時(shí)間才能形成單層或密集的懸浮物,取決于冷凍時(shí)細(xì)胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長(zhǎng)階段中的位置。冷凍的最佳條件在對(duì)數(shù)期。
4.被冷凍的原種細(xì)胞的年齡或冷凍時(shí)培養(yǎng)物的年齡
推薦的解決方案:解凍最近冷凍的細(xì)胞。細(xì)胞處于冷凍狀態(tài)的時(shí)間越長(zhǎng),存活率越低。檢查冷凍細(xì)胞的時(shí)間和方法。在冷凍時(shí)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)期。
出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下:
1.冷凍時(shí)細(xì)胞密度過低
推薦的解決方案:縮短解凍過程中的時(shí)間。將細(xì)胞取出后,立即將凍存管浸入在37℃的水浴中,并震蕩至全部融化,然后迅速地轉(zhuǎn)移到預(yù)熱的培養(yǎng)基中。
2.不適當(dāng)?shù)睦鋬鲞^程
推薦的解決方案:解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當(dāng)?shù)募夹g(shù),并確保使用了適量和適合的冷凍液。
出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢的可能原因及推薦解決方案如下:
1.培養(yǎng)瓶的大小
推薦的解決方案:一些細(xì)胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶中,使細(xì)胞密度上升;如,根據(jù)培養(yǎng)基的體積,從75cm2的燒瓶轉(zhuǎn)移到2或3個(gè)25cm2的燒瓶中。
2.細(xì)胞密度過低
推薦的解決方案:提高未來冷凍物種細(xì)胞的凍存密度,或使用較小的培養(yǎng)容器,或解凍多個(gè)試管來進(jìn)行培養(yǎng)。
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