出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：

1.解凍過程中細(xì)胞裂解

推薦的解決方案：可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為106至107細(xì)胞/毫升。

2.解凍過程中的問題

推薦的解決方案：在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時(shí)間為1-5天，但這不是保存的優(yōu)先方法。在37℃充分解凍后應(yīng)立即開始培養(yǎng)。

3.對冷凍液過敏

推薦的解決方案：
A.*或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時(shí)后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。

B.留出更多時(shí)間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時(shí)細(xì)胞需要幾周時(shí)間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時(shí)細(xì)胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的最佳條件在對數(shù)期。

4.被冷凍的原種細(xì)胞的年齡或冷凍時(shí)培養(yǎng)物的年齡

推薦的解決方案：解凍最近冷凍的細(xì)胞。細(xì)胞處于冷凍狀態(tài)的時(shí)間越長，存活率越低。檢查冷凍細(xì)胞的時(shí)間和方法。在冷凍時(shí)細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)期。

出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：

1.冷凍時(shí)細(xì)胞密度過低

推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時(shí)間。將細(xì)胞取出后，立即將凍存管浸入在37℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉(zhuǎn)移到預(yù)熱的培養(yǎng)基中。

2.不適當(dāng)?shù)睦鋬鲞^程

推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當(dāng)?shù)募夹g(shù)，并確保使用了適量和適合的冷凍液。

出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：

1.培養(yǎng)瓶的大小

推薦的解決方案：一些細(xì)胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶中，使細(xì)胞密度上升；如，根據(jù)培養(yǎng)基的體積，從75cm2的燒瓶轉(zhuǎn)移到2或3個(gè)25cm2的燒瓶中。

2.細(xì)胞密度過低

推薦的解決方案：提高未來冷凍物種細(xì)胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個(gè)試管來進(jìn)行培養(yǎng)。