為什么緩沖液的PH要大于包被蛋白的PI，原因有兩點(diǎn)：
一是因為蛋白質(zhì)與酶標(biāo)板的結(jié)合主要是靠疏水作用的物理吸附。而緩沖液的PH略大于包被蛋白的PI，有利于蛋白質(zhì)疏水鍵的適當(dāng)暴露。二是因為酶標(biāo)板聚苯乙烯表面暴露的主要是C－H鍵，而緩沖液的PH略大于包被蛋白的PI，可以使蛋白質(zhì)帶上負(fù)電荷，有利于蛋白質(zhì)與酶標(biāo)板的牢固結(jié)合，提高包被效率。所以我們常用的包被液體多位PH9.6的碳酸氫鈉緩沖液，當(dāng)然對PI低的蛋白質(zhì)也有使用PH7.4的包被液的情況。
（蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的英文縮寫是PI。 　　蛋白質(zhì)在溶液中有兩性電離現(xiàn)象。假設(shè)某一溶液中含有一種蛋白質(zhì)。當(dāng)PI=PH時該蛋白質(zhì)極性基團(tuán)解離的正負(fù)離子數(shù)相等，凈電荷為0，此時的該溶液的是PH值是該蛋白質(zhì)的PI值。某一蛋白質(zhì)的PI大小是特定的,與該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)，而與環(huán)境PH無關(guān)?！　≡谀骋籔H溶液中當(dāng)PH＞PI時該蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷。反之PH＜PI時該蛋白質(zhì)帶正電荷。PH=PI時該蛋白質(zhì)不帶電荷　　人體內(nèi)PH=7.4；而體內(nèi)大部分蛋白質(zhì)的 PI＜6； 所以人體內(nèi)大部分蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷）