植物ELISA試劑盒的實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物羥基自由基水平。用純化的植物羥基自由基抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物羥基自由基,再與HRP標記的羥基自由基抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的植物羥基自由基呈正相關。
用酶標儀測定吸光度,通過標準曲線計算樣品中植物羥基自由基濃度。
植物ELISA試劑盒的實驗操作步驟如下:
1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照圖表在小試管中進行稀釋。
2、加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑,再加入顯色劑B,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10、終止:每孔加終止液,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11、測定:以空白空調零,依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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