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植物ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)操作步驟
植物ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物羥基自由基水平。用純化的植物羥基自由基抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物羥基自由基，再與HRP標(biāo)記的羥基自由基抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的植物羥基自由基呈正相關(guān)。
用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物羥基自由基濃度。
植物ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照?qǐng)D表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑，再加入顯色劑B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
10、終止：每孔加終止液，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白空調(diào)零，依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值），測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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