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鱟試劑的正確使用及操作過(guò)程中要注意的事項(xiàng)
鱟試劑廣泛用于制藥、臨床以及科研等領(lǐng)域，用于細(xì)菌內(nèi)毒素和真菌葡聚糖檢測(cè)。鱟試劑是由海洋節(jié)肢動(dòng)物鱟的血液變形細(xì)胞溶解物制成的無(wú)菌冷凍干燥品，含有能被微量細(xì)菌內(nèi)毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，是從棲生于海洋的節(jié)肢動(dòng)物"鱟"的藍(lán)色血液中提取變形細(xì)胞溶解物，經(jīng)低溫冷凍干燥而成的生物試劑，能夠準(zhǔn)確、快速地定性或定量檢測(cè)樣品中是否含有細(xì)菌內(nèi)毒素和(1,3)-β-葡聚糖。
鱟試劑的正確使用：
內(nèi)毒素檢查法結(jié)果準(zhǔn)確與否與所用鱟試劑的靈敏度相關(guān)性很大，而鱟試劑的靈敏度與它的正確使用又密切相關(guān)。所以，一定要嚴(yán)格執(zhí)行鱟試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范使用鱟試劑。
保證所使用鱟試劑的質(zhì)量
鱟試劑的質(zhì)量主要表現(xiàn)于其靈敏度、自凝時(shí)間與成膠狀態(tài)三個(gè)方面：靈敏度穩(wěn)定;自凝時(shí)間不低于24h;具有一定的緩沖能力與合適的pH;反應(yīng)后即形成堅(jiān)實(shí)凝膠，將成膠安瓿翻轉(zhuǎn)180°而不會(huì)被破壞。而質(zhì)量稍差的鱟試劑存放一定時(shí)間后(如半年)其靈敏度可能發(fā)生變化，而靈敏度的改變會(huì)使測(cè)定結(jié)果所反映的供試品中內(nèi)毒素的允許限值發(fā)生變化。因此，需選擇具有國(guó)家頒發(fā)的批準(zhǔn)文號(hào),質(zhì)量穩(wěn)定的鱟試劑。
對(duì)鱟試劑靈敏度進(jìn)行監(jiān)測(cè)性復(fù)核
由于不同鱟試劑質(zhì)量不盡相同，即便是相同不同批號(hào)的鱟試劑也有差異,這便導(dǎo)致鱟試劑靈敏度復(fù)核值與標(biāo)示值不盡一致，因此鱟試劑的復(fù)核值對(duì)檢測(cè)結(jié)果有顯著影響。每使用新批號(hào)鱟試劑時(shí)應(yīng)復(fù)核其靈敏度;對(duì)留樣鱟試劑自生產(chǎn)之日起，每6個(gè)月進(jìn)行一次靈敏度檢測(cè)，其靈敏度在有效期內(nèi)應(yīng)符合規(guī)定。有研究表明，鱟試劑的靈敏度在符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及適當(dāng)?shù)馁A存條件下,3年內(nèi)其靈敏度變化不大，是穩(wěn)定的。建議可適當(dāng)延長(zhǎng)其有效期。因此，對(duì)鱟試劑靈敏度進(jìn)行監(jiān)測(cè)性復(fù)核有利于確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，同時(shí)可以最大程度地使用鱟試劑。
使用過(guò)程正確操作 選擇合適的操作方法與順序，在鱟試劑的使用過(guò)程中尤為重要。在操作過(guò)程中要注意以下幾點(diǎn)：
(1)實(shí)驗(yàn)室要求潔凈、無(wú)塵埃流通;檢驗(yàn)人員同時(shí)注意衛(wèi)生的保持。在整個(gè)使用操作過(guò)程中應(yīng)防止微生物的污染，例如空氣的流動(dòng)，人員的口沫、汗液污染等。
(2)鱟試劑開啟、溶解和配制時(shí)應(yīng)盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中，避免鱟試劑外損。
(3)鱟試劑中含有多種蛋白質(zhì)，用力振搖會(huì)產(chǎn)生氣泡，一旦起泡難以消除，而影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性，所以在整個(gè)操作過(guò)程中都要輕力以避免因過(guò)分震動(dòng)而引起的誤差。
(4)量取和加樣反應(yīng)物時(shí)，一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。
(5)生成凝膠的最適pH值為6～8，對(duì)于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液，不需考慮供試液的pH值，而檢查其他制劑時(shí)，尤其是一些本身緩沖能力較強(qiáng)或偏酸、堿的供試品，應(yīng)考慮供試品的pH值。
(6)使用時(shí)要嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間。當(dāng)鱟試劑一加入內(nèi)毒素及樣品混合液中時(shí)反應(yīng)已開始，并在一定的溫度范圍內(nèi)，反應(yīng)溫度越高，反應(yīng)速率越大;保溫時(shí)間的增長(zhǎng)，也會(huì)提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽(yáng)性的發(fā)生，導(dǎo)致較大誤差。因此，要注意控制溫度的變化和保溫時(shí)間。
(7)保持實(shí)驗(yàn)器具的潔凈。每次檢驗(yàn)完畢，應(yīng)及時(shí)將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理，待烤箱溫度升至設(shè)定的溫度后開始計(jì)時(shí)，干烤至少1h。也可用其他經(jīng)確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查的適宜方法。對(duì)于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h，用無(wú)熱原水沖洗，70℃干燥備用。
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