CELI酶是一種單鏈、雙鏈都特異識別的特異性核酸酶，目前CELI酶主要是從芹菜中提取，該酶可以特異性切割錯配堿基,廣泛應(yīng)用于突變檢測領(lǐng)域,傳統(tǒng)理論認(rèn)為該酶的催化活性只需要Mg2+和Zn2+。二硫蘇糖醇，英文名DL-Dithiothreitol，簡稱DDT,分子式為C4H10O2S2，分子量為154.25，常用作還原劑，有抗氧化作用。今天小編來介紹DTT在制備CELI家族酶酶切緩沖液中的應(yīng)用。

CELI家族酶酶切緩沖液由DTT、BSA（牛血清蛋白）、0.02%Triton X-100、0.1M KCl和HEPES緩沖液組成

其中：

含有DTT的CELI家族酶酶切緩沖液由Mutation DetectionKit-S100試劑盒緩沖液和DTT組成，Mutation DetectionKit-S100試劑盒緩沖液是美國基因公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為706025；

DTT在CELI家族酶酶切緩沖液中的濃度為0.01-0.5mM、0.5-10mM或0.01-6mM；

BSA濃度為2ug/ml；

HEPES緩沖液濃度為0.1M、pH值為7.5。

新的催化活性物質(zhì)DTT可以進(jìn)一步提高CELI酶活，特別是對低豐度突變的檢測，與傳統(tǒng)的酶切方法相比，本發(fā)明的方法更為靈敏，DTT的終濃度在0.01-10mM范圍內(nèi)都可以提高CELI酶和CELII酶的檢測靈敏度。對低豐度未知突變體的檢測，如某癌癥基因都有很好的檢測效果，特別是TILLING技術(shù)平臺檢測誘變?nèi)后w時(shí)，有明顯優(yōu)勢，不僅僅簡化了PCR純化步驟，同時(shí)相應(yīng)地提高了檢測分辨率。


參考文獻(xiàn)

CN106191228A  DTT在提高CELI家族酶活性中的應(yīng)用