目前，來源于肉類食品的飲食污染、其他食品或藥物誤服而導(dǎo)致的食源性興奮劑困擾事件層出不窮，食源性興奮劑的預(yù)防控制也成為各類體育賽事管理機(jī)構(gòu)和供應(yīng)服務(wù)基地保障的重要內(nèi)容。

食源性興奮劑

食源性興奮劑是指來源于食品中的興奮劑，包括一般性食品及保健食品中從生產(chǎn)到加工過程中天然存在或故意添加而殘留的興奮劑成分，如肉類食品多次被爆出的“瘦肉精”。“瘦肉精”是一大類藥物的總稱從興奮劑的分類來看，它屬于β-腎上腺素受體激動(dòng)劑。克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺是常見的三種在畜牧養(yǎng)殖使用的“瘦肉精”，同時(shí)也是常見的人為服用興奮劑。^[1]世界反興奮劑機(jī)構(gòu)在其2021年的指導(dǎo)性文件里特別指出，如果克倫特羅、萊克多巴胺等四種違禁物質(zhì)的陽性結(jié)果顯示濃度低于5納克/毫升，他們將進(jìn)行調(diào)查。^[2]

興奮劑成分檢測儀器靈敏度及相應(yīng)物質(zhì)的檢測標(biāo)準(zhǔn)的不斷提升、新技術(shù)的應(yīng)用為反興奮劑管理機(jī)制提供了堅(jiān)強(qiáng)保障。有關(guān)單位通過開展微生物檢驗(yàn)、樣品制備管理等，高質(zhì)量、高標(biāo)準(zhǔn)、高效率開展食品檢驗(yàn)檢測工作，監(jiān)測評(píng)估食品安全風(fēng)險(xiǎn)，竭力保障食源性興奮劑“零檢出”，使運(yùn)動(dòng)員得以安心訓(xùn)練備戰(zhàn)。^[3]

食品中4種瘦肉精類殘留量測定

依據(jù)《GB/T 22286-2008 動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》，試樣中的β-激動(dòng)劑經(jīng)過酶解，用高氯酸調(diào)節(jié)pH值，沉淀蛋白后離心，上清液用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH后用異丙醇-乙酸乙酯提取，用陽離子交換柱凈化，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測定，內(nèi)標(biāo)法定量。

儀器和耗材

1 儀器

Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀；

Auto EVA 60全自動(dòng)平行濃縮儀；

Agilent 1290II/6470 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

MCX固相萃取柱（RayCure，60mg/3mL）

全自動(dòng)固相萃取儀

全自動(dòng)氮吹濃縮儀

2 試劑

乙酸乙酯、異丙醇、甲醇均為色譜純；甲酸、高氯酸、氨水、氫氧化鈉；β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。

0.2mol/L乙酸鈉緩沖液：稱取13.6g乙酸鈉，溶解于500ml水中，用適量乙酸調(diào)節(jié)pH至5.2。

標(biāo)準(zhǔn)品：萊克多巴胺鹽酸鹽，克倫特羅鹽酸鹽，沙丁胺醇，特布他林硫酸鹽，100ng/ml。

內(nèi)標(biāo)物：沙丁胺醇-D3，克倫特羅-D9，10ng/ml。 

樣品制備

1 酶解

準(zhǔn)確稱取5g（精確到0.01g）經(jīng)搗碎的樣品于50mL離心管內(nèi)，加入0.2moL/L乙酸鈉溶液（pH=5.2）20mL，再加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶100μL，漩渦混勻，于37℃下避光水浴水解12h。

2 提取

添加1ml的內(nèi)標(biāo)工作液于待測樣品中，加蓋置于水平振蕩器震蕩15min，5000r/min高速離心10min，準(zhǔn)確取10mL上清液于另一50mL離心管中，用高氯酸調(diào)節(jié)PH至1.0±0.3，4000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中，用10moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至11，加入4~5g氯化鈉，加入異丙醇：乙酸乙酯=6:4 15mL，充分提取，4000r/min離心5min，吸取全部有機(jī)相到?？迫詣?dòng)氮吹濃縮儀EVA-60plus 50℃下氮?dú)獯蹈?，加?.2M乙酸銨溶液5mL溶解，超聲混勻，使殘?jiān)浞秩芙夂髠溆谩?/span>

3 凈化

將MCX固相萃取柱安裝在Raykol Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀上，依次用甲醇3 mL、水3 mL活化。備用液全部過柱，用水2 mL、2%甲酸水2ml、甲醇2 mL依次淋洗，抽干，用5％氨水甲醇溶液2 mL洗脫，收集洗脫液，使用EVA-60plus全自動(dòng)氮吹濃縮儀于40℃水浴氮?dú)獯蹈?，?0％乙腈水溶液（含0.1%甲酸）1.0 mL溶解，濾過，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。具體的固相萃取方法見圖。

結(jié)果與討論

為了驗(yàn)證該方法的回收率，本實(shí)驗(yàn)分別在豬肉樣品中加入鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、特布他林4種混合標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證(n=3)，加標(biāo)水平為0.5ug/kg，數(shù)據(jù)如表-2所示。加標(biāo)回收率在87.8-112.4%之間，RSD值控制在10%以內(nèi)。說明該方法能夠很好地運(yùn)用于豬肉中瘦肉精殘留量的檢測。

表-2.豬肉樣品加標(biāo)回收率及RSD值

注：其中克倫特羅的內(nèi)標(biāo)為克倫特羅-D9；沙丁胺醇、特布他林與萊克多巴胺的內(nèi)標(biāo)為沙丁胺醇-D3。

本解決方案操作方便、提取和濃縮效率高、回收率好。符合GB/T 22286-2008《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》要求。

食源性興奮劑的風(fēng)險(xiǎn)控制不僅要依靠檢測標(biāo)準(zhǔn)，還應(yīng)借鑒“預(yù)防為主”原則，加強(qiáng)“從農(nóng)田到餐桌”整個(gè)鏈條中食品安全的監(jiān)控，與時(shí)俱進(jìn)的檢測方法和技術(shù)手段的應(yīng)用利于防止誤食興奮劑事件的發(fā)生，運(yùn)動(dòng)員得以吃得健康、吃得安心。

參考文獻(xiàn)

[1]黃煒：運(yùn)動(dòng)員冬奧會(huì)期間不要吃中國肉！反興奮劑機(jī)構(gòu)又來了……,觀察者網(wǎng)

[2]冬奧會(huì)食品符合食源性興奮劑“零檢出”特殊要求,新華每日電訊/2022 年/1 月/19 日/第 006 版

[3]嚴(yán)字當(dāng)頭“零容忍” 全力以赴“零出現(xiàn)”——心懷“國之大者”，反興奮劑中心備戰(zhàn)北京冬奧會(huì),國家體育總局反興奮劑中心