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原代細胞如何取材,這些你都會嗎?

來源:蒂科(上海)生物科技有限公司   2022年02月09日 10:46  

一、取材的基本要求
1.取材要注意新鮮和保鮮
2.應(yīng)嚴格無菌
3.防止機械損傷
4.去除無用組織和避免干燥
5.應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等
6.作好記錄

二、各類組織的取材技術(shù)
皮膚和粘膜的取材
內(nèi)臟和實體瘤的取材
血液細胞的取材
骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
動物組織取材
人胚體組織取材
雞(鴨)鳥類胚胎組織取材

皮膚和粘膜的取材
主要取自于手術(shù)過程中的皮片,方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作,但面積一般2~4c㎡。

內(nèi)臟和實體瘤的取材
內(nèi)臟除消化道外基本是無菌的,但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位,實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區(qū)域,要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結(jié)締組織。

血液細胞的取材
血細胞、淋巴細胞的取材,一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細胞,取材時應(yīng)注意抗凝。

骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
嚴格無菌,注意抗凝,還要盡快分離培養(yǎng),離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。

動物組織取材
鼠胚組織取材
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物,然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中,5min后(注意時間不能太長,以避免酒精從口或其他通道進入體內(nèi),影響組織活力),取出動物,在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢,切開皮膚,用無菌操作法解剖取胚或用無菌止血鉗挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開皮膚,用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾,把動物反包,暴露軀干,然后再固定,更換無菌解剖器材,采用無菌操作法解剖取出胚胎。

幼鼠胚腎(或肺)取材
幼鼠采用上述方法處死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè):然后采用無菌法打開胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先將背部毛皮切開游離并拉向兩側(cè),然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。

人胚體組織取材
取材方法與鼠類相同
雞(鴨)鳥類胚胎組織取材步驟
(1)取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋,說明胚體發(fā)育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置。
(2)將胚蛋置于蛋架上,先用溫水清洗蛋殼,再用75%酒精棉球擦干;
(3)經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后,在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼;
(4)用眼科鑷撕去殼膜,暴露出雞胚;
(5)用彎頭鑷輕挑起胚頭,取出胚胎,放入無菌平皿中,解剖取材。

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