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原代細(xì)胞如何取材,這些你都會(huì)嗎?

來(lái)源:蒂科(上海)生物科技有限公司   2022年02月09日 10:46  

一、取材的基本要求
1.取材要注意新鮮和保鮮
2.應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌
3.防止機(jī)械損傷
4.去除無(wú)用組織和避免干燥
5.應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等
6.作好記錄

二、各類組織的取材技術(shù)
皮膚和粘膜的取材
內(nèi)臟和實(shí)體瘤的取材
血液細(xì)胞的取材
骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材
動(dòng)物組織取材
人胚體組織取材
雞(鴨)鳥(niǎo)類胚胎組織取材

皮膚和粘膜的取材
主要取自于手術(shù)過(guò)程中的皮片,方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作,但面積一般2~4c㎡。

內(nèi)臟和實(shí)體瘤的取材
內(nèi)臟除消化道外基本是無(wú)菌的,但取材時(shí)要明確和熟悉所需組織的類型和部位,實(shí)體瘤取材時(shí)要取腫瘤細(xì)胞豐富的區(qū)域,要避開(kāi)破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結(jié)締組織。

血液細(xì)胞的取材
血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的取材,一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞,取材時(shí)應(yīng)注意抗凝。

骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材
嚴(yán)格無(wú)菌,注意抗凝,還要盡快分離培養(yǎng),離心后,用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。

動(dòng)物組織取材
鼠胚組織取材
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物,然后將其整個(gè)浸泡在含有75%酒精的燒杯中,5min后(注意時(shí)間不能太長(zhǎng),以避免酒精從口或其他通道進(jìn)入體內(nèi),影響組織活力),取出動(dòng)物,在消毒過(guò)的木板上可用無(wú)菌的圖釘或大頭針固定四肢,切開(kāi)皮膚,用無(wú)菌操作法解剖取胚或用無(wú)菌止血鉗挾起皮膚、用無(wú)菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開(kāi)皮膚,用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾,把動(dòng)物反包,暴露軀干,然后再固定,更換無(wú)菌解剖器材,采用無(wú)菌操作法解剖取出胚胎。

幼鼠胚腎(或肺)取材
幼鼠采用上述方法處死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側(cè):然后采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先將背部毛皮切開(kāi)游離并拉向兩側(cè),然后采用無(wú)菌法從背部打開(kāi)腹腔取腎。

人胚體組織取材
取材方法與鼠類相同
雞(鴨)鳥(niǎo)類胚胎組織取材步驟
(1)取孵化至適當(dāng)胚齡(9~12天)的胚蛋,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管、胚體有運(yùn)動(dòng)的胚蛋,說(shuō)明胚體發(fā)育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置。
(2)將胚蛋置于蛋架上,先用溫水清洗蛋殼,再用75%酒精棉球擦干;
(3)經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后,在無(wú)菌條件下采用無(wú)菌法用剪刀或中號(hào)鑷子打開(kāi)氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼;
(4)用眼科鑷撕去殼膜,暴露出雞胚;
(5)用彎頭鑷輕挑起胚頭,取出胚胎,放入無(wú)菌平皿中,解剖取材。

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