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血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的實(shí)驗(yàn)原理及注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)原理
在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，常需要了解細(xì)胞生活狀態(tài)和鑒別細(xì)胞是否存活，確定細(xì)胞接種濃度和數(shù)量以及了解細(xì)胞活力和增殖狀況，如胰酶消化制備的細(xì)胞懸液中細(xì)胞存活率確定，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的活力檢測(cè)等。
存活測(cè)試的原理為染料排除實(shí)驗(yàn)，利用染料會(huì)滲入死細(xì)胞中而呈色，因活細(xì)胞細(xì)胞膜完整，染料無(wú)法滲入而不會(huì)呈色。一般使用臺(tái)盼藍(lán)染料，如果細(xì)胞不易吸收臺(tái)盼藍(lán)，則用赤蘚紅B。計(jì)算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/（活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù)）×100%。計(jì)數(shù)應(yīng)在臺(tái)盼藍(lán)染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成，隨時(shí)間延長(zhǎng)，部分活細(xì)胞也開始攝取染料；因?yàn)榕_(tái)盼藍(lán)與蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確。
注意事項(xiàng)
滴細(xì)胞懸液時(shí)要干凈利落，加量要適當(dāng)，過(guò)多易使蓋片漂移，或淹過(guò)蓋片也會(huì)失敗，應(yīng)重做；過(guò)少易出現(xiàn)氣泡；不理想時(shí)，應(yīng)重做。
鏡下計(jì)數(shù)時(shí)，若方格中細(xì)胞分布明顯不均勻，說(shuō)明細(xì)胞懸液混合不均勻，需重新將細(xì)胞懸液進(jìn)行混合，再重新計(jì)數(shù)。
計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)于位于邊線或交界處的細(xì)胞/細(xì)胞團(tuán)，遵循“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右”的規(guī)則。
一個(gè)細(xì)胞團(tuán)計(jì)做一個(gè)細(xì)胞。
計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，最適濃度為5～10×105細(xì)胞/ml，此范圍外計(jì)數(shù)誤差偏大。高濃度細(xì)胞懸液，可取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計(jì)數(shù)。如果細(xì)胞數(shù)目很少則要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。
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