乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒的使用方法與應(yīng)用！

一、背景

乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒是用于大腸菌群，糞大腸菌群，大腸桿菌的測定（GB標準）的固體顆粒培養(yǎng)基。乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒用溴甲酚紫作指示劑，該指示劑中性時呈藍紫色，酸性時呈黃色，大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，因此乳糖膽鹽發(fā)酵管里溶液顏色變成黃色和產(chǎn)生氣泡。膽鹽的作用：膽鹽對很多雜菌有抑制作用，但是對大腸桿菌不造成影響。成分（g/L）蛋白胨20.0g；牛膽鹽5.0g；乳糖10.0g；溴甲酚紫0.01g，PH值7.4±0.2。

二、檢驗原理

蛋白胨提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求；牛膽鹽可抑制革蘭氏陽性細菌的生長；乳糖是大腸菌群可發(fā)酵的糖類；溴甲酚紫是pH指示劑，酸性呈黃色，堿性呈紫色。

三、使用方法

1、稱取本品35克(單料)或70克(雙料)加入蒸餾水或去離子水1L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝于帶有小倒管的試管中，培養(yǎng)基每管10mL，115℃高壓滅菌15min。

2、樣品的處理及稀釋。

3、(1)食品：取1mL稀釋液，加入到含有10mL乳糖膽鹽培養(yǎng)基的試管中，根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)z樣污染情況的估計，選取三個合適的稀釋度每個稀釋度接種三管。將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。(2)一次性使用衛(wèi)生用品：取樣液5mL接種50mL單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。

4、將試管放入到培養(yǎng)箱中36±1℃培養(yǎng)24h。

5、觀察結(jié)果。如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則要進行分離、證實試驗。

四、應(yīng)用

用于乳品中大腸菌群快速檢測研究：

以國標法中乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為基本營養(yǎng)成分,分別研究構(gòu)建了檢測片法和細胞培養(yǎng)瓶劑法,并對模擬條件下的可逆性損傷大腸桿菌進行了復蘇實驗研究。為探索適合乳品中大腸菌群快速檢測的方法和提高檢出率打下研究基礎(chǔ)。

研究了一種用于快速檢測大腸菌群的細胞培養(yǎng)瓶劑法,即以國標法中的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為營養(yǎng)成分,經(jīng)濃縮、干燥后制成快速檢測瓶劑,以遴選的3.5 mol/LNaOH配制的百里香酚酞溶液作為產(chǎn)氣指示劑,并將其制成1×1cm規(guī)格產(chǎn)氣指示試紙。

樣品滴加細胞培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)24 h,依據(jù)培養(yǎng)瓶蓋上產(chǎn)氣指示試紙顏色變化及瓶內(nèi)溶液顏色變化,確定可疑陽性樣品,并對其進行氧化酶實驗及鏡檢,驗證大腸菌群的存在性。實驗對細胞培養(yǎng)瓶法進行了大腸菌群的重復性及實際樣品檢測,并與國標法進行了比較。

結(jié)果顯示,細胞培養(yǎng)瓶法與國標法所測結(jié)果符合率達96%,樣品檢測報告時間只需24 h,兩種方法所測結(jié)果在統(tǒng)計學上無顯著性差異(P>0.05)。細胞培養(yǎng)瓶劑法表現(xiàn)出明顯的技術(shù)優(yōu)勢,利于基層監(jiān)測機構(gòu)和生產(chǎn)企業(yè)對食品中大腸菌群的快速檢測。

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