在塑料生物可降解性評(píng)估體系中，或以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)EN 13432為代表的認(rèn)證體系中，陸生高等植物毒性試驗(yàn)均作為評(píng)估塑料生物可降解性性能的重要測(cè)試項(xiàng)目之一，正逐步得到測(cè)試機(jī)構(gòu)越來(lái)越多的重視。

但同時(shí)我們湖北洛克泰克儀器股份有限公司，作為多年深耕塑料生物降解設(shè)備和方法研究領(lǐng)域的企業(yè)，也充分了解和認(rèn)識(shí)到，當(dāng)前國(guó)內(nèi)客戶(hù)在逐步開(kāi)展該項(xiàng)檢測(cè)的時(shí)候，面臨了諸多的問(wèn)題。特此，我們希望能盡綿薄之力，幫助大家能夠更深入的理解標(biāo)準(zhǔn)和解惑試驗(yàn)當(dāng)中的問(wèn)題。

一、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的理解

針對(duì)歐盟EN 13432可降解材料認(rèn)證，其中的植物毒性試驗(yàn)主要依據(jù)其附錄E（Determination of ecotoxic effects to higher plants）和OECD 208（Terrestrial Plant Test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test）。

我們?cè)诶斫?/span>EN 13432的時(shí)候，要注意到這里的植物毒性試驗(yàn)并不是*照搬OECD 208。OECD的測(cè)試方法主要是針對(duì)已知化學(xué)品，進(jìn)行在理化性質(zhì)、生態(tài)系統(tǒng)影響、環(huán)境行為影響、人體健康影響幾大方面的試驗(yàn)和評(píng)價(jià)。初衷并不是用于塑料降解產(chǎn)物的評(píng)估，只是由于OECD 208等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)作為在人藥、獸藥、農(nóng)藥化學(xué)品評(píng)估方面的普遍認(rèn)可度，故充分參考和借鑒了OECD 208的測(cè)試原理和方法。因此，這也是很多人在閱讀理解OECD 208標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，會(huì)覺(jué)得讀不懂、不理解的原因之一。

另外，從OECD 208的標(biāo)題我們可以了解到，這個(gè)方法本意是包括兩部分試驗(yàn)：幼苗萌芽試驗(yàn)、幼苗生長(zhǎng)試驗(yàn)。其設(shè)計(jì)初衷是因?yàn)?，需先采用一個(gè)快速短期的幼苗萌芽試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)基體（土壤）進(jìn)行初步確認(rèn)是否適合選定的植株種子發(fā)芽，當(dāng)確認(rèn)可以后再進(jìn)行進(jìn)一步的長(zhǎng)期生長(zhǎng)試驗(yàn)。這是兩個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)。

但是，很多人在閱讀了標(biāo)準(zhǔn)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)并沒(méi)有闡述過(guò)多關(guān)于幼苗萌芽試驗(yàn)的過(guò)程，而只談到了幼苗生長(zhǎng)試驗(yàn)。這使得很多人又一次陷入了不理解的狀態(tài)。

其實(shí)，幼苗萌芽試驗(yàn)，需要我們回頭去閱讀EN 13432的附錄E部分，才會(huì)清楚明白試驗(yàn)過(guò)程。

二、對(duì)方法的理解

    OECD 208在評(píng)估化學(xué)品對(duì)植物生長(zhǎng)的影響時(shí)，采用的是類(lèi)似于制備不同濃度梯度化學(xué)品的方式，通過(guò)選定植株在經(jīng)噴灑過(guò)不同濃度化學(xué)品的土壤中生長(zhǎng)，最終通過(guò)植株生長(zhǎng)情況評(píng)估Ecx（Effect Concentration）或Erx（Effective Application Rate）值以及計(jì)算NOEC（No Observed Effect Concentration）和LOEC（Lowest Observed Effect Concentration）值。

    但當(dāng)EN 13432參考OECD 208時(shí)，并不能*按照以上方式去進(jìn)行試驗(yàn)。因?yàn)椋瑢?duì)于評(píng)估化學(xué)品，試驗(yàn)對(duì)象屬于已知物質(zhì)，人們可以通過(guò)配置不同已知濃度梯度進(jìn)行試驗(yàn)。但應(yīng)用于塑料降解產(chǎn)物（崩解后土壤）的評(píng)估時(shí)，試驗(yàn)對(duì)象是未知或者說(shuō)不明確的，我們不知道塑料降解后土壤里是何種潛在的有毒物質(zhì)。故按照EN 13432附錄E要求，需將參比底物（Reference Substrate）與崩解試驗(yàn)后的土壤按照25%和50%兩種比例混合，模擬在兩個(gè)濃度梯度條件下進(jìn)行試驗(yàn)。這就是很多人在初次閱讀理解EN 13432和OECD 208兩份標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，遇到的最大的不解之處。

三、對(duì)試驗(yàn)設(shè)置的理解

    在按照EN 13432附錄E進(jìn)行幼苗萌芽試驗(yàn)時(shí)，大家會(huì)很快面臨一個(gè)問(wèn)題，標(biāo)準(zhǔn)并未給出試驗(yàn)周期呀。其實(shí)，試驗(yàn)周期要根據(jù)選定的試驗(yàn)植株種子類(lèi)型進(jìn)行制定，并不是一概而論的。另外，在選擇試驗(yàn)植株種子時(shí)，也應(yīng)確保區(qū)域代表性，具體可參考OECD 208中“Criteria for selection of test species”一節(jié)。

    另外，在按照OECD 208進(jìn)行幼苗生長(zhǎng)試驗(yàn)時(shí)，光照強(qiáng)度是有一定要求的即300~400 μE/m²/s。首先，大家要注意到，這是一個(gè)不太常用的光強(qiáng)單位，它采用的是光量子數(shù)方式描述光照強(qiáng)度，主要用于園藝學(xué)領(lǐng)域。它與我們平時(shí)常見(jiàn)的單位“lux勒克斯”并沒(méi)有簡(jiǎn)單直接的數(shù)學(xué)換算關(guān)系，因?yàn)樵趩挝粫r(shí)間單位面積內(nèi)通過(guò)的光量子數(shù)會(huì)受到光源的距離、色溫、波長(zhǎng)、地理環(huán)境、氣候環(huán)境等諸多因素的影響。

    其次，需要特別注意到，OECD 208推薦的這個(gè)光強(qiáng)是按照“Greenhouse溫室”條件建立的，原文為“The following conditions are generally recommended for greenhouse testing”。

    陸生植物試驗(yàn)：幼苗萌芽和幼苗生長(zhǎng)試驗(yàn)

試驗(yàn)原理

    本方法用于評(píng)價(jià)在土壤中（或其他合適的土壤基質(zhì)）施用供試品后對(duì)出苗和較高植物早期生長(zhǎng)的影響。

    種子種入用供試品處理過(guò)土壤中，在對(duì)照組出苗率達(dá)到50%后的14到21天內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià)。終點(diǎn)測(cè)量是可見(jiàn)的出苗率、干苗重（也可為鮮苗重），某些情況下為苗高，也要評(píng)價(jià)植物不同部位上可見(jiàn)的有害的影響。這些測(cè)量和觀察與未處理的對(duì)照進(jìn)行比較。根據(jù)可能的暴露途徑，供試品混入土壤（或可能的人工土壤基質(zhì)）或噴灑在土壤表面，盡可能正確代表化學(xué)品潛在的暴露途徑。土壤混合時(shí)先進(jìn)行大量散土的混合，然后再裝入盆中，將所選植物種類(lèi)種子種入土壤中。表面施藥時(shí)，先將土壤裝入盆中，將種子種好，然后再?lài)娝?。試?yàn)體（對(duì)照和處理土壤及種子）放在適合植物生長(zhǎng)的環(huán)境中。本試驗(yàn)可根據(jù)研究目的測(cè)定劑量－反應(yīng)曲線，或單劑量／比率作為限度試驗(yàn)。如果單劑量／比率試驗(yàn)超出一定的毒性水平（例如觀察到的效應(yīng)高于X%)，要進(jìn)行范圍篩選試驗(yàn)測(cè)定毒性高和低限，再進(jìn)行多劑量試驗(yàn)產(chǎn)生劑量－反應(yīng)曲線。適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)分析方法分析獲得最敏感參數(shù)的作用濃度Ecx或有效施用率Erx(如C25,ER25,EC50,ER50)。同樣無(wú)作用濃度（NOEC)和zuidi作用濃度（LOEC)也能計(jì)算出來(lái)。

試驗(yàn)的有效性性

    為保證試驗(yàn)的有效性，對(duì)照組必須滿(mǎn)足以下條件：出苗率應(yīng)不少于70%;幼苗沒(méi)有可見(jiàn)的植物毒素影響（如變色病、壞死病、枯萎、葉子和莖的畸形），個(gè)別種類(lèi)的植株在生長(zhǎng)和形態(tài)上只有正常變異；試驗(yàn)期間，對(duì)照組幼苗平均存活率應(yīng)高于90%；特定品種的生長(zhǎng)環(huán)境條件應(yīng)保持一致，同時(shí)其生長(zhǎng)介質(zhì)中應(yīng)含有等量的人工土壤基質(zhì)、支持介質(zhì)或同樣來(lái)源的基質(zhì)。

    作為中國(guó)科學(xué)測(cè)試儀器研究型制造商，湖北洛克泰克儀器股份有限公司為客戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的科學(xué)測(cè)試儀器、測(cè)試方法、培訓(xùn)及技術(shù)服務(wù)。在生物降解測(cè)試領(lǐng)域，湖北洛克泰克儀器股份儀器有限公司提供生物降解測(cè)試儀器全方案，包括CMA、CNAS、Rheinland等認(rèn)證所需生物降解測(cè)試儀器等。

    洛克泰克公司秉承“技術(shù)推動(dòng)科學(xué)進(jìn)步”的使命，致力于我國(guó)的“碳達(dá)峰、碳中和”目標(biāo)，為政府、大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)及企業(yè)提供服務(wù)，實(shí)現(xiàn)更健康、更安全、更環(huán)保的高質(zhì)量發(fā)展。

湖北洛克泰克儀器股份有限公司成立于2013年，是優(yōu)良企業(yè)，擁有包括生物降解領(lǐng)域的近30余項(xiàng)證書(shū)。為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)厭氧發(fā)酵聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)產(chǎn)學(xué)研合作基地。