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簡(jiǎn)單介紹ELISA試劑盒的三種類(lèi)型
試劑盒是用于盛放檢測(cè)化學(xué)成分、藥物殘留、病毒種類(lèi)等化學(xué)試劑的盒子。一般醫(yī)院、制藥企業(yè)使用。
ELISA大致分為五種類(lèi)型：直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法、捕獲包被法。在商品化試劑盒中用得比較多的是雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法和間接法。
夾心法
雙抗體夾心法是夾心法中的一種主要形式，夾心法分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法：
雙抗體夾心法中抗原的2個(gè)不同的抗原表位被兩個(gè)抗體-捕捉抗體和檢測(cè)抗體，分別結(jié)合。捕捉抗體固定于載體即酶標(biāo)板上，檢測(cè)抗體通過(guò)結(jié)合抗原進(jìn)行顯色分析。
應(yīng)用于雙抗體夾心法檢測(cè)的捕捉抗體通常是單抗，偶爾有用多抗做為捕捉抗體的情況，但很少見(jiàn)，因?yàn)橐远嗫棺鳛椴蹲娇贵w容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)而降低特異性。
檢測(cè)抗體通常為多抗，在商業(yè)化的科研試劑盒中經(jīng)常用到生物素標(biāo)記的山羊多抗，再讓生物素標(biāo)記的多抗與HRP標(biāo)記的親和素或者鏈霉親和素結(jié)合，然后再加HRP也就是辣根過(guò)氧化物酶的底物，通常是TMB反應(yīng)顯色，這種方法是在傳統(tǒng)的HRP酶標(biāo)記抗體的雙抗體夾心法ELISA中引入了生物素-親和素放大系統(tǒng)。
競(jìng)爭(zhēng)法
競(jìng)爭(zhēng)法也是一種很常用的方法，一起看看：
競(jìng)爭(zhēng)法是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標(biāo)抗體/抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的分析方法。當(dāng)游離抗體(或抗原)濃度越高，則能與固定抗原(或抗體)結(jié)合的酶標(biāo)抗體(或抗原)就越少，后續(xù)顯色就越淺，即與對(duì)照相比，顯色越淺，表示檢測(cè)樣本中抗體(或抗原)含量越高。
該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測(cè)也可用于檢測(cè)比較不純的樣本，且重復(fù)性好，但是檢測(cè)的靈敏度和專(zhuān)一性較差。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原常用于檢測(cè)小分子抗原及半抗原，這類(lèi)抗原通常缺乏兩個(gè)以上的識(shí)別位點(diǎn)，不適用于雙抗夾心法進(jìn)行測(cè)定。該方法在商業(yè)化試劑盒中被廣泛運(yùn)用。
間接法
間接法只能用于測(cè)定抗體，主要用于疾病的診斷，其優(yōu)點(diǎn)是只需要改變包被抗原，酶標(biāo)抗體是通用的。間接法使用了二抗增加信號(hào)強(qiáng)度，也使抗體的選擇多樣化，然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)。
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