二硫蘇糖醇(Dithiothreitol,簡稱為DTT),外觀為白色粉末,CAS號: 3483-12-3,是一種小分子有機還原劑,被廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)、生物化學(xué)和生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域。
二硫蘇糖醇(DTT)是一種很強的還原劑,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。二硫蘇糖醇對一個典型的二硫鍵的還原是由兩步連續(xù)的巰基-二硫鍵交換反應(yīng)所組成。二硫蘇糖醇(DTT)的還原力受pH值的影響,只在pH值大于7的情況下能夠發(fā)揮還原作用。這是因為只有脫去質(zhì)子的硫醇鹽負離子才具有反應(yīng)活性,硫醇則沒有,而巰基的pKa一般為8.3。
二硫蘇糖醇(DTT)常用于還原蛋白分子和多肽的二硫鍵,通常作為蛋白質(zhì)巰基保護劑,在疫苗制劑中用于防止蛋白半胱氨酸殘基形成分子內(nèi)和分子間的二硫鍵。在核酸檢測過程中二硫蘇糖醇(DTT)可破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵,使RNA酶變性,有助于如RNA建庫,RNA擴增等實驗的進行。二硫蘇糖醇(DTT)還用于保護細胞和組織解毒劑,輻射防護劑等等。
不過,二硫蘇糖醇(DTT)往往無法還原包埋于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)部(溶劑不可及)的二硫鍵,這類二硫鍵的還原常常需要先將蛋白質(zhì)變性。
值得說明的是,二硫蘇糖醇(DTT)是一種有毒的物質(zhì),例如過渡金屬存在時,二硫蘇糖醇(DTT)會引起生物分子的氧化損傷,同時二硫蘇糖醇(DTT)還可強化一些含砷和汞的化合物毒性。二硫蘇糖醇(DTT)有刺鼻臭味,可因吸入、皮膚接觸而危害健康,因此操作時要做好防護,戴好口罩、手套及護目鏡,并在通風(fēng)柜內(nèi)操作。
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