芹菜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:

1, 先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。

2, 擴(kuò)增子的長(zhǎng)度應(yīng)不超過400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號(hào)。

4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)

5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測(cè),以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。

b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)

1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針

2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測(cè)探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。

3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會(huì)有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在

4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。

6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過30個(gè)bp。

7, 檢測(cè)探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人臍靜脈平滑肌細(xì)胞

人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）

人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪

人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝

人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞

小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人腦血管平滑肌細(xì)胞

人海馬神經(jīng)元

人少突膠質(zhì)細(xì)胞

人星形膠質(zhì)細(xì)胞

小鼠成纖維細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞

RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元