手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
雞卵泡顆粒細胞分離、培養(yǎng)實驗步驟：
A. 翅下靜脈注射2mL EDTA-2Na(W/V，2%)溶液處死母雞，新潔爾滅消毒液浸泡消毒5min，打開腹腔，剪取整個卵巢，小心剝離卵泡(以8-15g為最佳)，置于裝有PBS緩沖液的無菌培養(yǎng)皿中；
B. 用加有雙抗的PBS緩沖液沖去血污，漂洗3次；將漂洗干凈的卵泡移入裝有預冷PBS緩沖液的平皿中，剝凈卵泡外膜、結(jié)締組織及血管網(wǎng)；
C. 用手術(shù)刀在卵泡表面劃一道1-2cm長的切口(動作要快)，釋放卵黃，用PBS緩沖液將剩余的卵黃液漂洗干凈，剩下的卵泡膜即為：基膜和卵泡顆粒細胞層；
D. 將漂洗干凈的卵泡膜盡量剪碎，置于15mL離心管中，加4mL培養(yǎng)基，用1mL移液槍反復吹打1min，自然沉降5min，收集上清液備用；
E. 向離心管內(nèi)加入4mL 0.2%Ⅱ型膠原酶，重懸沉淀，置于37℃恒溫水浴鍋中消化30min，每5min震蕩一次；
F. 消化結(jié)束，加入4mL M199*培養(yǎng)基(含10%血清)終止消化；用200目不銹鋼篩過濾，收集濾液，1200rpm離心5min；
G. 沉淀用M199洗2次，室溫離心，1200rpm，5min；棄上清，加入M199*培養(yǎng)基(含5%FBS及1%雙抗)重懸后接種于6孔塑料培養(yǎng)皿，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)；12-24h后換液，隨后每天觀察，2-3天換液一次，待雞卵泡顆粒細胞生長融合用于實驗。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心