熒光濾光片的工作原理:分子在吸收帶吸收激發(fā)光譜,然后在發(fā)射帶發(fā)射長波的輻射光譜,即形成了熒光光譜。
在分析領域,熒光可用于對生物和化學活性進行定性判別、定量分析和實時觀察。
由于靈敏度高、特異性好、簡便等特點,熒光濾光片廣泛應用于生物和分析等領域。
熒光濾波片選取的原則是在成像端盡可能讓熒光/發(fā)射光透過,同時*阻擋激發(fā)光,獲得高信噪比。
尤其是對于多光子激發(fā)和全內(nèi)反射顯微鏡的應用,微弱的噪聲也會對成像效果造成很大的干擾,因此對信噪比的要求更高。
通常我們看濾光片的參數(shù)一般會看透射率光譜,但往往熒光相對于激發(fā)光的強度很弱,
選擇濾光片更需要參考阻擋深度光譜圖——OD值。OD值更能直觀地反映濾光片對光的阻擋特性。
在選擇激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片時,兩者的阻擋深度光譜交點(OD交點)是重要的判斷標準,
一般要求寬場光源激發(fā)是交點OD值大于5,激光激發(fā)時大于OD6,以實現(xiàn)較好的熒光信噪比。
通帶的高透過率提高成像亮度,截止帶的深截止度確保不必要的光都被阻擋在通帶外,保證了成像質(zhì)量的高信噪比和高對比度,在任何應用中產(chǎn)生最大的亮度和對比度。
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