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熒光檢測(cè)器是液相色譜系統(tǒng)的“眼睛”，測(cè)量離開柱的樣品的濃度或質(zhì)量。光電檢測(cè)器測(cè)量柱流出物的光吸收、熒光和折光率的變化。電化學(xué)和電導(dǎo)檢測(cè)器溶液的變化。其靈敏度在目前常用的HPLC檢測(cè)器中高，在HPLC中應(yīng)用較多。能發(fā)射熒光的物質(zhì)或能用柱前或柱后衍生法轉(zhuǎn)變成熒光衍生物的物質(zhì)均可以使用熒光檢測(cè)器進(jìn)行分析。
激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是熒光檢測(cè)的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì)檢測(cè)的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測(cè)靈敏度。
熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)以利于檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測(cè)辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長(zhǎng)的發(fā)射單色器，由光檢測(cè)元件檢測(cè)。zui終得到熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長(zhǎng)處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強(qiáng)的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí)，測(cè)定應(yīng)選擇zui大激發(fā)波長(zhǎng)。
一般所說的熒光光譜，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長(zhǎng)固定時(shí)，發(fā)射單色器進(jìn)行波長(zhǎng)掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(zhǎng)(即發(fā)射波長(zhǎng)，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測(cè)定時(shí)選擇合適的測(cè)定波長(zhǎng)的依據(jù)。
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