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鏈霉親和素純化介質(zhì)——一品多用，使用靈活，你get到了嗎？
鏈霉親和素(Streptavidin)是一種由同一亞基組成的四聚體蛋白。每個(gè)亞基與一個(gè)生物素分子結(jié)合，具有高度的親和力和特異性。蛋白或者抗體一旦生物素化，便可以結(jié)合在鏈霉親和素修飾的固相基底，如磁性材料或者是瓊脂糖上，進(jìn)行免疫共沉淀，結(jié)合在樹(shù)脂柱或者平板表面用作ELISA。
Streptavidin Agarose Resin 6FF將鏈霉親和素固定在高度交聯(lián)的6%瓊脂糖表面，主要用來(lái)純化亞氨基生物素或Strep標(biāo)記的蛋白、抗體、核酸等物質(zhì)，或者是固定生物素化蛋白后分離其他蛋白，如免疫沉淀。
表1 Streptavidin Agarose Resin 6FF親和介質(zhì)產(chǎn)品特性
參數(shù) | 指標(biāo) |
基質(zhì)（Matrix） | 高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 鏈霉親和素 |
粒徑（Bead size） | 45-165 µm |
載量（Capacity） | ＞200 nmol Biotin/mL介質(zhì) |
最大壓力（PressureMax） | 0.3 MPa，3 bar |
pH穩(wěn)定范圍（pH range） | 2-10 |
1、直接快速分何生物素化分子，應(yīng)用廣泛，使用靈活。
2、專一性高，非特異性干擾少，結(jié)合穩(wěn)定。
3、純化樹(shù)脂材質(zhì)穩(wěn)定。
4、結(jié)合容量高。
5、Streptavidin Agarose Resin 6FF可特異性結(jié)合多種標(biāo)簽，如下表所示。
表2 鏈霉親和素可特異性結(jié)合的標(biāo)簽
名稱 | 結(jié)合能力 | 蛋白純化洗脫條件 | 推薦應(yīng)用 |
生物素 | 強(qiáng) | 強(qiáng)力變性緩沖液 | 固定生物素化抗體純化抗原，或固定生物素化蛋白來(lái)分離其他蛋白，如免疫沉淀 |
2-亞氨基生物素 | 較強(qiáng) | 酸性pH=4 | 純化帶此標(biāo)簽的蛋白，可重復(fù)使用。 |
可斷裂的生物素化試劑 | 強(qiáng) | 還原條件下 | 純化帶此標(biāo)簽的蛋白 |
Strep-tag II | 弱 | 用生物素競(jìng)爭(zhēng)洗脫 | 純化帶此標(biāo)簽的蛋白 |
Twin-Strep-tag | 較弱 | 用生物素競(jìng)爭(zhēng)洗脫 | 純化帶此標(biāo)簽的蛋白 |
1、平衡，使填料處于和樣品一樣的緩沖環(huán)境
2、上樣，通過(guò)重力將樣品上樣至色譜柱結(jié)合
3、洗雜，除去非特異性結(jié)合的雜蛋白
4、洗脫，將結(jié)合的目的蛋白從填料上洗脫
圖1 Streptavidin Agarose Resin 6FF純化亞氨基生物素標(biāo)簽蛋白結(jié)果電泳圖
圖2 Streptavidin Agarose Resin 6FF純化Twin-Strep-tag標(biāo)簽蛋白結(jié)果電泳圖
問(wèn)題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過(guò)高 | 填料被堵塞 | 清洗樹(shù)脂。 |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，或離心去除。 | ||
樣品太黏稠 | 樣品中含高濃度的核酸，延長(zhǎng)破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5µg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min | |
緩沖液太黏稠 | 有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速。 | |
洗脫組分中無(wú)目的蛋白 | 過(guò)度的裂解使目的蛋白變性 | 使用溫和的裂解條件，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。 |
目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 | 在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10 mM | |
目的蛋白沒(méi)有*洗脫下來(lái) | 洗脫體積太少 | 增加洗脫液體積，減小洗脫流速。 |
洗脫液中鹽酸胍的pH 發(fā)生改變 | 使用新鮮配制的洗脫液 | |
洗脫液孵育時(shí)間不夠 | 增加洗脫液與凝膠的孵育時(shí)間 |
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Streptavidin Agarose Resin 6FF?鏈霉親和素瓊脂糖純化樹(shù)脂 | 20512ES08 | 5 mL | 1586.00 |
20512ES25 | 5 mL×5 | 6356.00 | |
20512ES60 | 100 mL | 16796.00 | |
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML?生物素分子純化預(yù)裝柱，1ML | 20513ES03 | 1 mL | 428.00 |
20513ES08 | 1 mL×5 | 1328.00 | |
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML?生物素分子純化預(yù)裝柱，5ML | 20514ES08 | 5 mL | 1158.00 |
20514ES25 | 5 mL×5 | 4958.00 |
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Streptavidin (SAV) MagBeads 鏈霉親和素（SAV）免疫磁珠 | 47503ES03 | 1 mL | 728.00 |
經(jīng)典文章分享：一文書(shū)紙，教您如何使用樹(shù)脂和預(yù)裝柱純化產(chǎn)品！
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