手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
二手PCR儀每個循環(huán)包括哪三個關(guān)鍵步驟
二手PCR儀是一種核酸檢測和定量分析的新方法，可以作為傳統(tǒng)實時定量PCR的替代方法，以實現(xiàn)一致定量及稀有等位基因的檢測。數(shù)字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應(yīng)，部分這些反應(yīng)包含了靶標(biāo)分子(陽性)，而其他不包含(陰性)。單個分子可以被擴(kuò)增一百萬倍或更多。在擴(kuò)增期間，TaqMan化學(xué)試劑及染料標(biāo)記探針可用于檢測特定序列的靶標(biāo)。當(dāng)不存在任何靶標(biāo)序列時，沒有信號累積。PCR分析后，陰性反應(yīng)片段用于生成樣品中靶標(biāo)分子的一致計數(shù)，而無需標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)標(biāo)。
二手PCR儀每個循環(huán)包括這三個關(guān)鍵步驟。通常，它運行40個周期。
1、幼化：雙鏈DNA通過高溫孵育“溶解”成多肽鏈，單鏈DNA的二級結(jié)構(gòu)松動。一般DNA聚合酶可以承受較大的溫度(一般為95℃)。如果免費模板的GC含量高，時間會有所提高。
2、熱處理：在整個熱處理過程中，與開放閱讀框的緊密接觸有機(jī)會引起雜交雜交。因此，解鏈溫度(TM)應(yīng)根據(jù)計算個人所得稅的引物設(shè)計，并選用合適的溫度(一般比引物設(shè)計的TM低5℃)。
3、擴(kuò)寬：70-72℃中間，DNA聚合酶活性為，引物加寬速度可達(dá)每秒100個堿基。隨即，熒光定量PCR中擴(kuò)增的精彩畫面就小了。通常，該步驟與溫度為60°C的熱處理步驟相結(jié)合。使用隨機(jī)引物設(shè)計或寡核苷酸(DT)和隨機(jī)引物設(shè)計化學(xué)品。用于cDNA轉(zhuǎn)化的溫度取決于所選的RT酶。逆轉(zhuǎn)錄后，將約10%的cDNA轉(zhuǎn)移到單獨的試管中進(jìn)行及時的熒光定量PCR。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心