中腦核仁蛋白抗體生物素化標記實驗要點：

1.如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質在反應前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；

2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質之間的分子比按蛋白質表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件；

3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結合位點可能因此被封閉,導致抗體失活；

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；

5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結合力或活性；

6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結合；

7.交聯(lián)反應后,應充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結合產生競爭作用；

8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。

溫馨提示：

在實驗后,請注意回收稀釋的抗體?；厥盏目贵w在進行Western實驗時至少可以重復使用10次。稀釋后的抗體，包括已經使用過的稀釋抗

體，4二保存?；厥蘸笾貜褪褂玫目贵w，使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心

1-3分鐘,取上清用于后續(xù)檢測。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長需長菌等情況,則可以考慮廢棄該抗體。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

JNK相互作用蛋白4抗體

氨基末端激酶1/2抗體

氨基末端激酶1/2/3抗體

氨基末端激酶1/3抗體

連接蛋白JPH4抗體

組蛋白去甲基轉移酶JMJD7抗體

磷酸化原癌基因c-Jun抗體

磷酸化活化蛋白激酶D抗體

磷酸化活化蛋白激酶B抗體

磷酸化活化蛋白激酶B抗體

磷酸化組蛋白去甲基化酶JMJD2B抗體

絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白2抗體

絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗體

磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體

磷酸化蛋白質酪氨酸激酶JAK-1抗體

氨基末端激酶2抗體

連接介導調節(jié)蛋白抗體

氨基末端激酶3抗體

磷酸化活化蛋白激酶B抗體

JmjC結構域組蛋白去甲基化酶H3-K36抗體

組蛋白去甲基化酶JARID2抗體

JAK和微管相互作用蛋白2抗體

活化蛋白激酶B抗體

磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體

凋亡細胞清除受體抗體

磷酸化原癌基因c-Jun抗體

Notch配體Jagged 2蛋白抗體