什么是LNA
LNA 是新型的核酸類似物,它包含了2'-氧4' 碳亞甲基連接,這個連接限制了呋喃核糖環(huán)的靈活性,因而將其結(jié)構(gòu)鎖定成一個剛性的雙環(huán)模式,因此而提高雜交效率和*的穩(wěn)定性。
LNA 熒光探針優(yōu)點(diǎn):
1.增強(qiáng)熱穩(wěn)定性和雜交的特異性
對實時定量PCR探針提出LNA化學(xué)產(chǎn)品增強(qiáng)雙鏈體的熱穩(wěn)定性,同時加強(qiáng)對目標(biāo)序列雜交的特異性。因此,由非所需激活的熒光背景將大量減少,從而使信號對背景噪音的比例增大。
LNA 單分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了其探針與目標(biāo)序列雜交后的穩(wěn)定性,與普通的DNA熒光探針相比,其雙鏈在相同的鹽溶液中,每增加一個單體LNA分子將導(dǎo)致其熔點(diǎn)提升8°C。強(qiáng)化后的雜交性能可以顯著的擴(kuò)大實驗檢測的環(huán)境限制,同時允許在單試管中進(jìn)行更復(fù)雜的試驗??梢酝ㄟ^調(diào)整LNA堿基在探針中的位置來調(diào)節(jié)*熔點(diǎn)(Tm)和雜交的特異性。
2.更易及靈活的探針設(shè)計來檢測有問題的目標(biāo)序列
由于LNA 強(qiáng)化的雜交特征和對熔點(diǎn)溫度的影響,含有LNA的實時定量PCR探針,長度較短,可以增加設(shè)計的靈活性,同時附和檢測設(shè)計的指南。因此普通DNA探針某些設(shè)計的局限或無法解決的問題都可被減少或消除。
例如, 含大量AT的實時定量PCR探針通常需要30堿基以上(有時超過40堿基)來達(dá)到擴(kuò)增設(shè)計的指南,但是可能效果較差。LNA熒光探針的應(yīng)用可靈活選擇LNA的位置,以達(dá)到高特異性的設(shè)計,短的探針可以很有效的工作,甚至短到13到20個堿基。
3.適用于多種實時定量PCR 系統(tǒng)
LNA 熒光探針適用于多種實時定量PCR 系統(tǒng),這基于染料和設(shè)備的激發(fā)/發(fā)射的波長。這為您提供在固定的周期實驗環(huán)境下自由的選擇儀器與試劑系統(tǒng)的組合。這無需額外的資本投入。
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