国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

基因組DNA提取純化的注意事項

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2022年05月11日 13:59  

大多數(shù)動物組織可以用裂解緩沖液和蛋白酶/蛋白酶 K 進行高效裂解。在加入裂解液之前需要將組織切成小塊,有條件的話建議使用 TissueLyser 或研缽等提前進行均質化。骨骼肌,心臟,皮膚等組織含有收縮蛋白,結締組織和膠原蛋白,所以利用蛋白酶 / 蛋白酶 K 進行充分消化是必須的。

FFPE 樣本進行 DNA 純化時需要預裂解。福爾馬林可由 PBS 洗滌除去,石蠟可由二甲苯和乙醇進行去除。在蛋白酶消化后提高孵育的溫度有助于逆轉交聯(lián),以便更好的從 FFPE 組織中釋放 DNA,從而有助于提高 DNA 產(chǎn)量和改善下游檢測性能。 從 FFPE 中得到的 DNA 通常比從新鮮或凍存樣本中得到的 DNA 分子量??;DNA 降解的程度則取決于樣本類型,儲存時間和固定的條件。

溶液.png


從微量樣本中純化 DNA

微量樣本中 DNA 的含量很低,通常小于 5 ng DNA, 通常需要使用 carrier RNA 來提高產(chǎn)量(不會影響下游分析檢測)。如果需要使用 carrier RNA,那么在測量 OD 的時候會因為使用 carrier RNA 造成濃度測量有偏差(因為 RNA 在 260 nm 也有吸收)。

推薦使用 QIAamp DNA Micro Kit 從微量樣本中進行 DNA 純化,該試劑盒采用 MinElute 硅膠膜柱,洗脫體積可以低至 20 μl,同時通過兩步洗滌去除 PCR 抑制劑等污染物,最/大程度從微量樣本中純化 DNA。

從血液樣本中純化 DNA

血液樣本可以是新鮮或凍存全血或干血片,由于血液樣本在采集后會迅速凝固,所以通常在采血時使用 EDTA,檸檬酸鹽或肝素進行抗凝。經(jīng)過抗凝處理的血液樣本可以直接用于 DNA 純化,需要注意的是使用的 DNA 純化方法需要能夠去除上述抗凝劑,以免干擾下游 PCR 檢測。全血也可以在 DNA 純化前先進行白細胞富集等再進行 DNA 純化。

從血液中純化 DNA 的產(chǎn)量很大程度上取決于血液中的白細胞數(shù)量,而白細胞數(shù)量則和血液的供體情況有很大關聯(lián)(如貧血或感染都會造成白細胞數(shù)量變化)。上述情況必須在進行 DNA 純化前就應該考慮到。此外,有些動物有有核血,這意味著這類樣本中含有更多的 DNA,在從此類血樣中純化 DNA,上樣量需要減少 10 倍左右。

從細胞中純化 DNA

哺乳動物細胞可以使用蛋白酶 K 進行裂解

酵母細胞需要首先使用溶/菌酶對細胞壁進行處理,然后使用蛋白酶或蛋白酶 K 進行消化

許多細菌細胞可以使用裂解 buffer 和蛋白酶 / 蛋白酶 K 進行裂解,某些細菌如革蘭氏陽性菌需要預先使用溶菌/酶對細胞壁進行處理

細菌細胞需要先從生物體液中沉淀,然后從中純化細菌 DNA,拭子樣本需要先使用殺菌劑進行預處理然后再離心

使用機械裂解會比用酶消化的效果要好,尤其是針對革蘭氏陽性菌或真菌而言

 

免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
  • 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
江口县| 德格县| 上杭县| 景泰县| 阳江市| 大方县| 灵寿县| 鄂伦春自治旗| 读书| 白银市| 阜阳市| 德惠市| 夏邑县| 白沙| 历史| 海林市| 黔江区| 江源县| 旌德县| 陆丰市| 达孜县| 定边县| 黎城县| 长宁区| 宣威市| 德令哈市| 叶城县| 织金县| 团风县| 南溪县| 海丰县| 凌源市| 石景山区| 望江县| 涿州市| 贺州市| 安吉县| 和平区| 缙云县| 扎囊县| 宁晋县|