常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(增殖,凋亡,遷移,分化之類的),受消化影響不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化(難消化細(xì)胞例外)即可。但少數(shù)實(shí)驗(yàn),比如病毒包裝,對細(xì)胞代數(shù),對細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個時候,胰酶消化,就是潤洗,都會對細(xì)胞包裝病毒的能力有影響,傳代次數(shù)一多,細(xì)胞包裝能力就會逐漸下降(當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化,用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關(guān)酶的活性,來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面,但不切割任何蛋白。
細(xì)胞消化三種方式
機(jī)械消化法
直接用液體吹打或用刮刀,施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離;適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代,但相較于其它消化方法,這種外力無法量化控制,細(xì)胞分散效果差,且可能會造成大量細(xì)胞破損,使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基,進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。
離子螯合法
細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié),當(dāng)然也包含各種黏附蛋白(例:整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等),螯合劑會在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用,讓細(xì)胞較容易在施予外力時,脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散。
0.02% EDTA是細(xì)胞傳代常用的離子螯合劑,在37℃作用效果很佳(消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。
但EDTA無法用血清終止其反應(yīng),所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液(如:PBS)清洗離心,以免影響后續(xù)細(xì)胞貼盤效果。
酶消化法
用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì),適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。
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