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HPLC過程中影響待測(cè)組分遷移的因素較多，同一組分在不同色譜條件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作條件下，同一組分在不同色譜柱上的保留值也可能有很大差別。因此，在高效液相色譜分析過程中，對(duì)定性分析方法提出了更高的要求。
?。?）利用檢測(cè)器的選擇性進(jìn)行定性將經(jīng)色譜柱分離后的樣品引入并聯(lián)或串聯(lián)的幾種不同檢測(cè)器，根據(jù)它們不同的檢測(cè)性能，視其出峰情況可以初步判別出未知化合物的具體類別。
?。?）反相色譜中的“a、C”指數(shù)定性在以硅膠為固定相的反相色譜中，待測(cè)組分保留值與流動(dòng)相組成關(guān)系式中的系數(shù)能夠反映待測(cè)組分的結(jié)構(gòu)特征，因此可用于待測(cè)組分的輔助定性。
反相色譜中有機(jī)調(diào)節(jié)劑的濃度c與待測(cè)組分的分配比之間滿足對(duì)數(shù)線性關(guān)系，可表示為：
lnk=a+Cc（10.8）
式中，a、C分別為與流動(dòng)相性質(zhì)、固定相性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)。
基于式（10.8），盧佩章等列出了460種化合物在C18柱上不同條件下的a、C指數(shù)，并提出可不同柱系統(tǒng)、不同沖洗劑濃度組成時(shí)，a、C指數(shù)之間的換算方法。在相同的色譜條件下，如果樣品中某一組分的a、C指數(shù)與某已知標(biāo)樣相同，即可認(rèn)定兩者為同一種化合物。
此外，待測(cè)組分的分配比k作為一種結(jié)構(gòu)型物性參量，其對(duì)數(shù)值與同系物碳數(shù)n之間存在良好的線性關(guān)系。
lnk=a+bm（10.9）
式中，a、b為常數(shù)。對(duì)于包含同系物組分的樣品，如果已知部分同系物在色譜圖中的位置，此時(shí)，可以根據(jù)碳數(shù)規(guī)律來推測(cè)其他同系物組分。
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