分析細胞狀態(tài)不好原因:
一、胰酶消化過度
在用胰酶消化細胞使其不貼壁的時候,如果消化時間過長,會導(dǎo)致細胞膜表面蛋白也被破話,嚴重者可致細胞破碎、死亡。所以胰酶消化不宜過久。如果消化了好久(具體消化時間視細胞而定)在鏡下看還有很多細胞貼壁,可能是胰酶消化力弱。增強胰酶消化能力的方法:消化前用PBS洗以去除血清中的各種蛋白;在胰酶中加入EDTA;在消化前胰酶37攝氏度預(yù)熱。
二、傳代比例太低
細胞在培養(yǎng)基中生長的時候,除了外源營養(yǎng)物質(zhì),其自身也會分泌促進生長的物質(zhì)。如果一個皿中細胞數(shù)量太少,細胞分泌的營養(yǎng)物質(zhì)支撐不了“一大家子”的細胞,細胞狀態(tài)就不好。不要因為偷懶而減少傳代比例,以及細胞懸液要吹打均勻讓傳代的細胞就是你要的比例。
三、污染
在(細菌或真菌)污染的早期,還未出現(xiàn)明顯的細胞外形被嚴重破壞、培養(yǎng)基變黃的時候,細胞可能出現(xiàn)大量死亡、形狀怪異、有大團細胞簇擁的現(xiàn)象。這時候你再養(yǎng)一兩天,就能看到細胞變成馬賽克(細菌污染)或者培養(yǎng)基肉眼可見渾濁有絮絮(真菌污染)。
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