酪氨酸激酶JAK2蛋白對于造血細(xì)胞的JAK / STAT細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)至關(guān)重要。

體細(xì)胞 JAK2 V617F 突變在骨髓增殖性腫瘤 （MPN） 中很常見，其中靜脈和動脈血栓形成是導(dǎo)致死亡的主要原因。

然而，JAK2 在止血中的作用尚不清楚。因此，研究人員在維西蒂血液研究所研究了該蛋白在JAK2敲除小鼠血小板止血中的作用。

研究概述

該研究使用了血小板和巨核細(xì)胞（MKs）中缺乏JAK2的小鼠。研究人員收集了動物的血液和組織，以分析全血細(xì)胞計數(shù)，血涂片，血漿血管性血友病因子（WWF）水平和股骨免疫組化。他們還確定了尾部出血時間。

血小板分析

對于血小板制備，研究人員從眶后神經(jīng)叢中收集血液并將其抗凝在酸性檸檬酸葡萄糖中。他們通過離心分離血小板并將其重懸于緩沖溶液中。

他們使用這些樣品來分析血小板表面糖蛋白，血小板蛋白和血小板聚集。

離體灌注測定

先，研究人員預(yù)先涂覆了Cellix的微通道。Vena8 熒光+ 生物芯片含1型膠原蛋白。在洗滌和阻斷后，研究人員使用Cellix的VenaFlux平臺通過膠原蛋白包被的生物芯片灌注從小鼠收集的血液。研究人員分析了JAK2Plt-/-在全血中在動脈剪切速率（1500 s -1）下粘附1型膠原蛋白并形成血栓的能力，見圖3 A-B。

圖 3.來自法萊特等人。減少動脈剪切速率下JAK2Plt-/-血小板的血栓形成。將來自Jak2Plt1 / 1和Jak2Plt2 / 2小鼠的PPACK抗凝全血標(biāo)記并以1500 s21的動脈剪切速率在1型膠原固定表面上灌注。（一）代表3分鐘的靜止圖像。條形表示 100 mm. （B） 3 分鐘時的熒光強度。結(jié)果代表SD±平均值，并使用未配對的學(xué)生t檢驗進(jìn)行比較（每組n = 3;P=.0317）。

結(jié)果

減少動脈剪切速率下JAK2敲除血小板的血栓形成

• 3分鐘后，JAK2Plt-/-血小板的平均熒光強度為3.25%±2.69%，對照組為12.38±4.07%。

• 血小板表現(xiàn)出相似的停留時間。

• 血栓形成，而不是初的血小板粘附，在JAK2Plt-/-小鼠中受損。

本研究中的其他實驗

氯化鐵誘導(dǎo)的血栓形成

研究人員將連接到血管周圍流量計的微血管流量探頭定位到小鼠的頸動脈中以監(jiān)測血流。然后，他們使用10%氯化鐵（FeCl3）誘導(dǎo)血管損傷。之后，他們記錄了血流量和次閉塞的時間。

激光誘導(dǎo)血栓形成

該實驗涉及使用激光誘導(dǎo)血管損傷。一臺高速相機捕獲了熒光圖像，科學(xué)家們用它來分析數(shù)據(jù)。血小板和纖維蛋白積聚和/或外滲證實損傷持續(xù)存在。

這些實驗的主要發(fā)現(xiàn)：

• 敲除小鼠發(fā)生嚴(yán)重的血小板增多癥并增加未成熟的血小板分?jǐn)?shù)。血小板糖蛋白表達(dá)、纖維蛋白原和VWF均正常。

• 缺乏JAK2蛋白的小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的脾腫大和異常造血。

• JAK2Plt-/-小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的出血素質(zhì)，中位出血時間為8.20分鐘，而對照組為2.29分鐘。

• JAK2Plt-/-小鼠在長達(dá)30分鐘內(nèi)未能在FeCl3-誘導(dǎo)的損傷后表現(xiàn)出閉塞。在激光誘導(dǎo)損傷后觀察到類似的結(jié)果。

• 缺乏JAK2的小鼠表現(xiàn)出有缺陷的血栓形成。

• JAK2Plt-/-血小板在不同激動劑的刺激下顯示擴散，聚集和信號傳導(dǎo)受損。

結(jié)論

這些結(jié)果表明，JAK2缺失會損害小鼠的血小板活化和止血功能。

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