轉(zhuǎn)染的類型
細胞轉(zhuǎn)染試劑已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)試劑,轉(zhuǎn)染試劑在基因功能研究、基因表達調(diào)控、突變分析,以及基因治療、細胞治療、蛋白生產(chǎn)、疫苗生產(chǎn)等方面應(yīng)用廣泛。
根據(jù)轉(zhuǎn)染后核酸是否整合到宿主細胞染色體中分成“瞬轉(zhuǎn)”(瞬時轉(zhuǎn)染)和“穩(wěn)轉(zhuǎn)”(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染)。不同轉(zhuǎn)染方法的轉(zhuǎn)染效率、細胞毒性、對正常生理學(xué)的影響和基因表達水平各不相同,其原理、應(yīng)用與特點比較如下表所示:
表1 不同轉(zhuǎn)染方法的比較
技術(shù) | 原理 | 優(yōu)點 | 缺點 |
化學(xué)轉(zhuǎn)染方法 | |||
陽離子脂質(zhì)體 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞。 | 操作快速簡單 結(jié)果可重復(fù) 轉(zhuǎn)染效率高 可轉(zhuǎn)染DNA,RNA和蛋白質(zhì) 適用于生產(chǎn)瞬時和穩(wěn)定的蛋白質(zhì) 可用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染 | 需進行條件優(yōu)化(一些細胞系對陽離子脂質(zhì)體較敏感) 有些細胞系不容易轉(zhuǎn)染 血清的存在干擾復(fù)合物的形成,導(dǎo)致低轉(zhuǎn)染效率 培養(yǎng)基中血清的缺失會增加細胞毒性 |
磷酸鈣共沉淀 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞 | 便宜且容易獲得 適用于生產(chǎn)瞬時和穩(wěn)定的蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)染效率高(不限制細胞系) | 需要仔細制備試劑 – CaPO4溶液對pH,溫度和緩沖鹽濃度的變化敏感 可重復(fù)性較差 有細胞毒性,尤其對原代細胞 不能采用RPMI培養(yǎng)基,由于其含高濃度的磷酸鹽 不適用于動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染 |
葡聚糖 | 帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞。 | 操作簡單 結(jié)果可重復(fù) 便宜 | 對某些細胞有化學(xué)毒性 只限于瞬時轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染效率低,尤其在原代細胞中 |
其他陽離子聚合物 | 帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進入細胞。 | 在血清中穩(wěn)定,對溫度不敏感 高轉(zhuǎn)染效率(限制細胞系) 結(jié)果可重復(fù) | 對某些細胞有毒性 不能生物降解(樹枝狀大分子) 多用于瞬時轉(zhuǎn)染,較少用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 |
生物轉(zhuǎn)染方法 | |||
病毒轉(zhuǎn)染 | 本能感染細胞,傳遞遺傳物質(zhì) | 高轉(zhuǎn)染效率 適用于較難轉(zhuǎn)染的細胞系 可用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染 可用于構(gòu)建穩(wěn)定表達或瞬時表達的細胞系 | 被轉(zhuǎn)染的細胞系必須含毒受體 基因插入大小受限(病毒載體~10 kb,非病毒載體~100 kb) 技術(shù)難度高,且構(gòu)建重組蛋白很費時 存在生物安全問題(激活潛在疾病,免疫原性反應(yīng),細胞毒性,插入突變,使細胞惡性轉(zhuǎn)化) |
物理轉(zhuǎn)染方法 | |||
電轉(zhuǎn) | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入。 | 原理簡單 條件優(yōu)化后可產(chǎn)生重復(fù)性的結(jié)果 不需要載體 不限制細胞類型和條件 條件優(yōu)化后可以快速轉(zhuǎn)染大量細胞 | 需要特殊的設(shè)備 需要優(yōu)化電轉(zhuǎn)脈沖和電壓參數(shù) 對細胞傷害很大 細胞死亡率很高因此需要大量細胞 會不可逆轉(zhuǎn)地損壞細胞膜,溶解細胞 |
生物傳遞粒子傳遞(粒子轟擊) | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達。 | 不限制細胞類型和條件 可用于動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染 方法直接,結(jié)果可靠 不限制導(dǎo)入基因的大小和數(shù)量 | 需要昂貴的設(shè)備 會對樣品產(chǎn)生物理損傷 細胞死亡率很高因此需要大量細胞 需要準(zhǔn)備微粒 轉(zhuǎn)染效率相對較低 對于研究應(yīng)用成本較昂貴 |
顯微注射 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核。 | 不限制細胞類型和條件 可以單細胞轉(zhuǎn)染 方法直接,結(jié)果可靠 不限制導(dǎo)入基因的大小和數(shù)量 不需要載體 | 需要昂貴的設(shè)備 有技術(shù)要求,且是勞動密集型(一次只能轉(zhuǎn)染一個細胞) 轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限 常引起細胞死亡 |
產(chǎn)品特點
針對DNA轉(zhuǎn)染試劑與RNA轉(zhuǎn)染試劑,翌圣生物擁有雄厚的研發(fā)與生產(chǎn)團隊,不斷優(yōu)化配方,改良生產(chǎn)工藝,推出了多款以陽離子脂質(zhì)體與陽離子聚合物為基礎(chǔ)的產(chǎn)品,為廣大科研院校與企業(yè)提供的產(chǎn)品,產(chǎn)品線覆蓋轉(zhuǎn)染試劑涉及的各個領(lǐng)域。
Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 磷酸鈣法細胞轉(zhuǎn)染試劑 | Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺 | Hieff Trans™懸浮細胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 |
40802ES | 40803ES | 40804ES | 40805ES |
Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑MW25000 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000(rapid lysis) 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000 | |
40806ES | 40815ES | 40816ES |
高效性:適合瞬時轉(zhuǎn)染或者穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。
低毒性:轉(zhuǎn)染的細胞仍保持很好的活性。
適應(yīng)性廣:普通細胞、難轉(zhuǎn)染的原代細胞全面覆蓋。
操作簡便:適合血清存在的培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染前后無需更換培養(yǎng)基。
性價比高:經(jīng)濟實用,轉(zhuǎn)染效率高,價格低。
選擇指南
轉(zhuǎn)染試劑的選擇,需要根據(jù)實驗?zāi)康呐c實驗內(nèi)容的不同進行選擇,如轉(zhuǎn)染的物質(zhì)、具體的細胞、操作的便捷性等因素綜合考量。
產(chǎn)品 | Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 磷酸鈣法細胞轉(zhuǎn)染試劑 | Hieff Trans™懸浮細胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑MW25000 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000(rapid lysis) 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000 |
細胞類型 | 常規(guī) | 常規(guī) | 常規(guī) | 常規(guī) | 常規(guī) | 常規(guī) |
難轉(zhuǎn)染 | 難轉(zhuǎn)染 | 難轉(zhuǎn)染 | ||||
核酸類型 | DNA | DNA | DNA | DNA | DNA | |
siRNA | siRNA | siRNA | ||||
miRNA | ||||||
mimic miRNA | ||||||
antimiRNA | ||||||
DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染 | DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染 | |||||
多質(zhì)粒病毒包裝 | 多質(zhì)粒病毒包裝 | 多質(zhì)粒病毒包裝 | 多質(zhì)粒病毒包裝 |
應(yīng)用案例
Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑
Hieff TransTM以無菌的液體形式提供。通常情況下對于24孔板轉(zhuǎn)染,每次用1.5 μL左右,則1 mL Hieff TransTM約可做660次轉(zhuǎn)染;對于6孔板,每次用6 μL左右,則1 mL Hieff TransTM約可做160次轉(zhuǎn)染;
更多詳情請參見Hieff Trans™脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,讓您對轉(zhuǎn)染自信滿滿
Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000(rapid lysis) 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000
PEI 40000是一種分子量為40000的高電荷陽離子聚合物,非常容易結(jié)合帶負電荷的核酸分子,形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進入細胞中。PEI 40000是一種瞬時轉(zhuǎn)染試劑,細胞毒性低,轉(zhuǎn)染效率高,在HEK293和CHO等細胞中基因表達效率較高。目前已經(jīng)驗證線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 、Sf9、HepG2和Hela細胞等。轉(zhuǎn)染效率高達80%~90%。
更多詳情請參見轉(zhuǎn)染新寵——PEI MAX (線性PEI MW 40000)更高效的轉(zhuǎn)染試劑
Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
該產(chǎn)品可在廣泛的細胞系中,實現(xiàn)1 nM的siRNA超過90%的表達效率,避免了脫靶效應(yīng)。適用于多種細胞轉(zhuǎn)染,包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等貼壁細胞;以及難以轉(zhuǎn)染的懸浮細胞系,如K562或THP-1細胞,可達到80%的沉默效率;同時還包括一些原代細胞,原代人成纖維細胞和原代人肝細胞等,可達到80%的沉默效率。
轉(zhuǎn)染條件參考
除各產(chǎn)品的說明書外,客戶根據(jù)各自具體的實驗內(nèi)容進行操作,在使用量上會有不同的差異,根據(jù)客戶使用產(chǎn)品后反饋的體外細胞轉(zhuǎn)染條件,進行了整理,供大家參考。
產(chǎn)品名稱/貨號 | Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑/40802ES | ||||
細胞 | 培養(yǎng)容器 | 鋪板密度 | DNA量 | Hieff trans量 | 轉(zhuǎn)染效率 |
A549 | 6 well | 90% | 0.7 μg | 1.15 μL | +++ |
BV 2 | 24 well | 95% | 0.2 μg | 0.2 μL | ++ |
C2C12 | 24 well | 80% - 90% | 1 μg | 5 μL | ++ |
DF 1 | 24 well | 80% - 90% | 0.5 μg | 0.5 μL | +++ |
H520 | 6 well | 80% | 1.2μg | 6 μL | ++ |
HaCaT | 96 well | 70% | 100 ng | 1 μL | ++ |
HCT116 | 6 well | 90% | 4 μg | 10 μL | ++ |
HEK 293 | 6 well | 95% | 2 μg | 10 μL | 80 - 90% |
HEK 293FT | 24 well | 85% | 1 μg | 4 μL | 90% |
HEK 293T | 12 well | 1×105 | 1 μg | 2 μL | +++ |
HEK 293T(懸?。?/span> | 30 ml | 80% | 30 μg | 60 μL | ++ |
Hela | 12 well | 90% | 0.2μg | 0.6 μL | 90% |
Hela | 12 well | 80% | 1 μg | 3 μL | +++ |
HepG2 | 12 well | 80% | 1 μg | 3 μL | ++ |
HUVEC | 24 well | 80% | 1 μg | 2 μL | ++ |
MCF10A | 10 cm dish | 60% | 5 μg | 15 μL | ++ |
N2A | 24 well | 70% - 80% | 300 ng | 900 μL | + |
NCI H1975 | 6 well | 80% | 4 μg | 10 μL | +++ |
NIH 3T3 | 6 well | 90% | 4 μg | 10 μL | +++ |
Raw 264.7 | 35 mm dish | 80% | 1 μg | 2 μL | 90% |
Vero | 6 well | 80% | 3 μg | 9 μL | +++ |
細胞 | 培養(yǎng)容器 | 鋪板密度 | siRNA量 | Hieff trans量 | 轉(zhuǎn)染效率 |
HK2 | 6 well | 65% | 100 pmol | 6 μL | +++ |
常見問題
一 Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑
Q: 配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時能否有血清的存在?
A: 血清的存在會影響脂質(zhì)體的形成,建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時采用無血清培養(yǎng)基(一般推薦MEM 培養(yǎng)基)。
Q: 使用Hieff Trans™脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么?
A:
1)細胞轉(zhuǎn)染時,細胞密度以80%-95%為佳,具體鋪板密度根據(jù)細胞情況酌情而定;
2)使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率;
3)制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑;
4)轉(zhuǎn)染的時候培養(yǎng)基中不能添加抗生素;
5)試劑應(yīng)該在2-8℃度保存,要注意避免多次反復(fù)長時間開蓋;
6)初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
Q:轉(zhuǎn)染后需要進行終止嗎?
A:不需要。脂質(zhì)體復(fù)合物可以穩(wěn)定存在6個小時。如果在進行轉(zhuǎn)染前沒有進行細胞換液,為了保證細胞正常生長所需的營養(yǎng),需要在4~6小時后換用新的培養(yǎng)基。但如果轉(zhuǎn)染之前已進行過換液,則在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后不需要進行再次換液。
Q:可否進行DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染?效果如何?
A:可以,DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染時候,siRNA轉(zhuǎn)染效率會略微差點。
Q:轉(zhuǎn)染試劑可否進行慢病毒包裝的轉(zhuǎn)染呢?
A:慢病毒包裝是可以的。
Q:懸浮細胞轉(zhuǎn)染是否可以用Hieff Trans™脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑?
A:Hieff Trans™脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑可以用于懸浮細胞轉(zhuǎn)染,具體操作可見Protocol。另外,我們還推出了專門用于懸浮細胞的轉(zhuǎn)染試劑(Cat No. 40805, 懸浮細胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑)。
二 Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
Q: 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染后需要換液嗎?
A: 對于該問題可以分為兩種情況:1、轉(zhuǎn)染之前如果沒有換液應(yīng)在轉(zhuǎn)染6小時左右后換液,以保證細胞生長所需營養(yǎng);2、如果轉(zhuǎn)染之前如果有換液,可以按照培養(yǎng)細胞正常操作待??后進行換液操作。
Q:轉(zhuǎn)染試劑可以凍存嗎?
A:不可凍存,因為轉(zhuǎn)染試劑是一種PEI陽離子轉(zhuǎn)染試劑,低溫下凍存,會破壞PEI轉(zhuǎn)染試劑的活性,因此是2-8℃度儲存,保持轉(zhuǎn)染效能。
產(chǎn)品訂購
名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES01 | 100 μL | 168.00 |
40802ES02 | 0.5 mL | 738.00 | |
40802ES03 | 1.0 mL | 1308.00 | |
40802ES08 | 5×1mL | 4878.00 | |
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細胞轉(zhuǎn)染試劑 | 40803ES70 | 200 T | 625.00 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/ml) | 40804ES76 | 500 μL | 180.00 |
40804ES86 | 5×500 μL | 500.00 | |
Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent 懸浮細胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40805ES01 | 100 μL | 228.00 |
40805ES02 | 0.5 mL | 948.00 | |
40805ES03 | 1.0 mL | 1678.00 | |
40805ES08 | 5×1 mL | 5268.00 | |
Hieff TransTM in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑 | 40806ES01 | 0.1 mL | 372.00 |
40806ES02 | 0.5 mL | 1472.00 | |
40806ES03 | 1.0 mL | 2572.00 | |
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑MW25000 | 40815ES03 | 1 g | 1855.00 |
40815ES08 | 5×1 g | 7255.00 | |
Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000(rapid lysis)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000 | 40816ES02 | 100 mg | 655.00 |
40816ES03 | 1 g | 1855.00 | |
40816ES08 | 5×1 g | 7255.00 |
使用產(chǎn)品已發(fā)表的部分文獻
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