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磁珠提取實時熒光定量PCR的引物設(shè)計和普通PCR的引物設(shè)計有什么區(qū)別？
磁珠提取實時熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光集團，利用熒光信號來實時監(jiān)測整個PCR進程，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板濃度進行定量分析。
磁珠提取實時熒光定量PCR在PCR擴增反應(yīng)體系中加入熒光基團，通過對擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測。
傳統(tǒng)的PCR進行檢測時，擴增反應(yīng)后需要進行染色處理及電泳分離，并且只能作定性分析，不能準(zhǔn)確定量，易造成污染出現(xiàn)假陽性，使其應(yīng)用受到限制。實時定量PCR技術(shù)不僅實現(xiàn)了對模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和*的特點，使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。
應(yīng)用實時熒光定量PCR方法同時輔助病原分離、序列測定等手段，能夠及時、準(zhǔn)確的對疾病作出診斷。實驗室對檢測的方法的更新與改進持續(xù)進行，例如多重?zé)晒舛縋CR檢測方法建立等，以期更好的為養(yǎng)殖場服務(wù)。
引物設(shè)計：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，通過熒光信號不斷累積而實現(xiàn)實時監(jiān)測PCR全程，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中，對全程PCR擴增過程進行實時檢測，根據(jù)反應(yīng)時間和熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。實時熒光定量PCR儀應(yīng)安放在濕度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩(wěn)臺面上，不能有強光直射，室內(nèi)應(yīng)通風(fēng)良好，無腐蝕性氣體。
而普通pcr引物設(shè)計：為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。引物應(yīng)用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計并具有特異性。產(chǎn)物不能形成二級結(jié)構(gòu)。引物長度在15～30堿基之間。
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