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應(yīng)用文集 | 聚集體分析「柱」力提高生物制藥關(guān)鍵質(zhì)量屬性
眾所周知，蛋白質(zhì)通常容易由于環(huán)境條件刺激而發(fā)生聚集，形成二聚體和大分子量低聚物或高階結(jié)構(gòu)。這在生物治療蛋白質(zhì)的生產(chǎn)中尤為重要，因?yàn)槟繕?biāo)蛋白質(zhì)需要承受的多種環(huán)境條件都可能誘導(dǎo)聚集。這些條件包括發(fā)酵過程中溫度和濃度的變化，以及下游處理過程中 pH 和濃度的變化。甚至剪切力（來自葉輪葉片、攪拌器和其他工程設(shè)備）也可能導(dǎo)致應(yīng)激相關(guān)聚集。聚集體，特別是分子量非常大的多聚體以至不溶性微粒的存在，都可能會(huì)對(duì)健康有害。因此，必須量化和確定聚集水平，并予以限制。
體積排阻色譜是特別適合從高階聚集體中分離單體峰的技術(shù)之一。使用合適的濃度檢測(cè)器，例如 UV 或 DAD，可以相對(duì)直觀地進(jìn)行定量。抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）等更為復(fù)雜的分子可能更具挑戰(zhàn)性，因?yàn)槭杷约?xì)胞毒性藥物的存在可能導(dǎo)致許多體積排阻色譜柱無法發(fā)揮理想性能。為解決這一問題，安捷倫開發(fā)了一種新的固定相，可顯著降低次級(jí)相互作用的風(fēng)險(xiǎn)。因此，新型 AdvanceBio SEC 色譜柱非常適合聚合物的快速分離和定量。
本應(yīng)用文集分別從入門指南篇、體積排阻色譜操作指南篇、精選應(yīng)用簡報(bào)篇分類介紹創(chuàng)新的 AdvanceBio SEC 色譜柱如何精準(zhǔn)定量分析蛋白質(zhì)聚集體研究的完整工作流程及應(yīng)用案例，進(jìn)而“柱”力提高生物藥行業(yè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性。準(zhǔn)備好了嗎？系好您的安全帶，立刻啟航！
體積排阻色譜操作指南篇
利用生物分子在溶液中的體積而進(jìn)行色譜分離的方法即為體積排阻色譜 (SEC)。與其他色譜模式不同，SEC 的分離不依靠分析物和色譜柱固定相之間的任何化學(xué)作用。這是從多種干擾物（包括聚集體、輔料、細(xì)胞碎片及其他降解產(chǎn)生的雜質(zhì)）中分離和分析完整蛋白質(zhì)的理想解決方案。因此，SEC 廣泛應(yīng)用于開發(fā)和生產(chǎn)過程中的生物治療性分子表征。
優(yōu)勢(shì)如下
SEC 分析方法簡單直接
利用 SEC，分子可按其在溶液中的尺寸為參照，做到從大到小依次分離。非常大的分子不會(huì)進(jìn)入填充柱床，會(huì)在死體積內(nèi)先洗脫。大小適中的分子依據(jù)其體積的不同可以不同程度地滲透進(jìn)微孔中（圖 1），而小的分子在微孔結(jié)構(gòu)中擴(kuò)散深，從而后洗脫。
圖 1. 不同體積的分子以不同程度滲入固定相孔隙內(nèi)
體積排阻色譜法適用于分離和定量蛋白質(zhì)混合物，因此是重組蛋白生產(chǎn)過程中的一種重要質(zhì)控手段。包括測(cè)定聚集體（二聚體、三聚體、四聚體等）以及從較大分子量的蛋白質(zhì)中分離低分子量的輔料和雜質(zhì)（圖 2）。
圖 2. IgG 聚集體和輔料的分離
完整 lgG 單體和二聚體的分離條件
洗脫順序通常由分子量大小決定，分子量大的分子先被洗脫，但 SEC 真正的分離機(jī)制是基于分子在溶液中的體積。大多數(shù)蛋白是緊湊型球形結(jié)構(gòu)，但一些蛋白分子是圓柱形，因此可能會(huì)比預(yù)期洗脫更早，這是由于它們?cè)谌芤褐杏兄蟮牧黧w動(dòng)力學(xué)半徑（圖 3）。此外，不同的流動(dòng)相也會(huì)影響洗脫順序，因?yàn)槿芤褐蟹肿芋w積會(huì)改變（流體動(dòng)力學(xué)半徑或回轉(zhuǎn)半徑）。
圖 3. 緊湊型球狀蛋白與圓柱形蛋白的對(duì)比
SEC-UV/DAD 方法開發(fā)指南
針對(duì)生物分子、聚集體分析（肽、多肽和蛋白質(zhì)）的基于體積的分離選擇初始色譜柱和條件。
精彩亮相
安捷倫提供各種 SEC 色譜柱，可滿足您的所有體積排阻分析需求。
此外，本篇應(yīng)用文集中還包含 AdvanceBio SEC、Bio SEC-3 及標(biāo)準(zhǔn)品協(xié)助方法開發(fā)等簡報(bào)，可供查閱，為生物治療蛋白質(zhì)關(guān)鍵質(zhì)量屬性提供新方法，新思路。
AdvancBio SEC
部件號(hào) | 標(biāo)題 |
5994-0876EN | 使用 Agilent AdvanceBio SEC 200 ? 1.9 µm 色譜柱開發(fā) NIST mAb 的體積排阻色譜分析方法 |
5991-6791CHCN | 使用 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱分析聚乙二醇化蛋白質(zhì) |
5991-7165CHCN | 使用 Agilent AdvanceBio SEC (SEC) 色譜柱對(duì)生物制劑進(jìn)行靈敏的高通量體積排阻色譜 |
5991-6458ZHCN | 使用快速高分離度體積排阻色譜柱分析生物治療藥物中的聚集體 |
5991-6304CHCN | 利妥昔單抗聚集體和片段的高分離度 SEC 分離與定量分析 |
5991-6303CHCN | 利用 SEC 和水相流動(dòng)相進(jìn)行 mAb 和 ADC 聚集體的定量分析 |
5991-6302CHCN | 用于聚集體分析的 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱：儀器兼容性 |
5991-6474CHCN | Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱在生物治療藥物分析方面的優(yōu)勢(shì) |
Bio SEC-3
部件號(hào) | 標(biāo)題 |
5991-2463EN | 為 Agilent Bio SEC-3 色譜柱選擇適合的校準(zhǔn) |
5991-3955EN | 利用 Agilent 1260 Infinity 多檢測(cè)器 Bio-SEC 解決方案的先進(jìn)的光散射檢測(cè)功能確定蛋白質(zhì)分子量和分子大小 |
5990-9894CHCN | Agilent Bio SEC 柱用于生物分子表征的孔徑優(yōu)化 |
許多標(biāo)準(zhǔn)品可用于協(xié)助方法開發(fā)、分子量估算和系統(tǒng) QC 測(cè)試。
部件號(hào) | 標(biāo)題 |
5190-9416 | AdvanceBio SEC 130 ? 凍干蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，1.5 mL |
5190-9417 | AdvanceBio SEC 300 ? 凍干蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，1.5 mL |
PL2070-0100 | 聚乙二醇校準(zhǔn)試劑盒，PEG-10，10 × 0.5 g |
PL2080-0101 | 聚環(huán)氧乙烷校準(zhǔn)試劑盒，PEO-10，10 × 0.2 g |
PL2090-0101 | 普魯蘭多糖校準(zhǔn)試劑盒 |
5191-5744 | Agilent-NISTmAb 標(biāo)準(zhǔn)品，1/包 |
5191-5745 | Agilent-NISTmAb 標(biāo)準(zhǔn)品，4/包 |
方法別“聚”一格
分析“碼”到成功
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