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N-2無血清添加劑神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2022年06月01日 10:41  
N-2無血清添加劑(N-2 supplement,serum free)神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)

 

概述

神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell)是指存在于神經(jīng)系統(tǒng)中,具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的潛能,從而能夠產(chǎn)生大量腦細(xì)胞組織,并能進(jìn)行自我更新,并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。

在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)中B-27與N-2添加劑的使用十分廣泛,N-2添加劑主要被用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)來源的有絲分裂后期的神經(jīng)元的生長和表達(dá)。

25.png

圖1. 神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)展

神經(jīng)系統(tǒng)疾病及治療機(jī)理

神經(jīng)系統(tǒng)疾病是指發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的以感覺、意識(shí)、運(yùn)動(dòng)等障礙為主要表現(xiàn)的疾病。包括帕金森病、阿爾茨海默病、卒中性側(cè)索硬化癥(漸凍癥)、多發(fā)性硬化癥、亨廷頓病、脊髓損傷、外傷性腦損傷等。

神經(jīng)干細(xì)胞的治療機(jī)理是:(i)患病部位組織損傷后釋放各種趨化因子,可以吸引神經(jīng)干細(xì)胞聚集到損傷部位,并在局部微環(huán)境的作用下分化為不同種類的細(xì)胞,修復(fù)及補(bǔ)充損傷的神經(jīng)細(xì)胞。由于缺血、缺氧導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞的損傷,使局部通透性增加,另外在多種黏附分子的作用下,神經(jīng)干細(xì)胞可以透過血腦屏障,高濃度的聚集在損傷部位;(ii)神經(jīng)干細(xì)胞可以分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子,促進(jìn)損傷細(xì)胞的修復(fù);(iii)神經(jīng)干細(xì)胞可以增強(qiáng)神經(jīng)突觸之間的聯(lián)系,建立新的神經(jīng)環(huán)路。

N-2添加劑的應(yīng)用

1、膠質(zhì)前體細(xì)胞分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞

星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多功能膠質(zhì)細(xì)胞,參與構(gòu)成大腦的物理結(jié)構(gòu),具有支持神經(jīng)細(xì)胞、維持神經(jīng)元周圍離子濃度、免疫調(diào)節(jié)等重要作用。膠質(zhì)前體細(xì)胞 (GPC),也稱為膠質(zhì)限制性祖細(xì)胞 (GRP) 或少突膠質(zhì)祖細(xì)胞(OPC),是具有分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞潛力的細(xì)胞。GPC群體來源于組織或通過分化從多能細(xì)胞產(chǎn)生,這是由外源性應(yīng)?因?誘導(dǎo)的。在這里,我們描述了?種可以調(diào)整以利于分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞或少突膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1)培養(yǎng)基配制

培養(yǎng)基組分

添加量(mL)

DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基,1X

97

N-2無血清添加劑

1

胎牛血清

2

2)實(shí)驗(yàn)流程

26a.jpg

圖2. 膠質(zhì)前體細(xì)胞分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)流程圖

 

2、?質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)

星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的膠質(zhì)細(xì)胞類型,負(fù)責(zé)支持皮層回路活動(dòng)所需的一系列功能,包括神經(jīng)遞質(zhì)再攝取、維持離子穩(wěn)態(tài)以及參與突觸形成和消除。同時(shí),神經(jīng)元對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞參與層特異的分子發(fā)育調(diào)控具有支持補(bǔ)充作用。神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細(xì)胞作為神經(jīng)系統(tǒng)功能單位,它們之間的相互作用在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中非常重要,參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)從胚胎發(fā)生到老化的各個(gè)活動(dòng),貫穿了神經(jīng)元的整個(gè)發(fā)育過程。

實(shí)驗(yàn)步驟

1)培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基組分

添加量(mL)

DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基,1X

88

N-2無血清添加劑

1

胎牛血清

10

青霉素-鏈霉素

1

可選擇添加:EGF(制備為100 μg/mL原液)

0.02

【注】表皮生長因子(EGF)也可以添加,以增強(qiáng)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖。

2)實(shí)驗(yàn)流程

27a.jpg

圖3. ?質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)流程圖

 

名詞小貼士:

神經(jīng)(Nerve),是由聚集成束的神經(jīng)纖維所構(gòu)成。 而神經(jīng)纖維本身是由多個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞構(gòu)成,其神經(jīng)元的構(gòu)造為軸突外并被神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞所形成的髓鞘包覆。 如此神經(jīng)能將訊息從動(dòng)物身體一處傳遞到另外一處,使動(dòng)物能協(xié)調(diào)指揮動(dòng)作與進(jìn)行各種工作。

神經(jīng)元(neuron),又名神經(jīng)原或神經(jīng)細(xì)胞,是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能單位之一。人腦中,神經(jīng)細(xì)胞約有860億個(gè)。

神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs),是自我更新的多能細(xì)胞,可分化為神經(jīng)系統(tǒng)的主要表型。這些細(xì)胞類型包括神經(jīng)元,星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。

神經(jīng)祖細(xì)胞(NPC),是干細(xì)胞分裂的后代,其通常在體內(nèi)經(jīng)歷有限數(shù)量的復(fù)制循環(huán)。大腦中有許多“專業(yè)的”細(xì)胞,比如神經(jīng)細(xì)胞,少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)細(xì)胞傳遞和接受信息。少突膠質(zhì)細(xì)胞包裹著神經(jīng)細(xì)胞,為神經(jīng)細(xì)胞更快地傳遞信息提供幫助。星形膠質(zhì)細(xì)胞(星形細(xì)胞)通過提供營養(yǎng)和從身體的其他部位調(diào)節(jié)進(jìn)入大腦來支持神經(jīng)系統(tǒng)。

 

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1、高效培養(yǎng),質(zhì)量優(yōu)良;

2、質(zhì)控嚴(yán)格,嚴(yán)格無菌、無內(nèi)毒素;

3、批次穩(wěn)定,批間差異??;

4、貨期迅速,現(xiàn)貨供應(yīng)。

試劑訂購

培養(yǎng)基及添加劑

 

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

N-2 supplement,serum free,100X N-2無血清添加劑,100×

60706ES

5 mL

B-27 supplement,serum free,50X B-27無血清添加劑,50X

60703ES

10 mL

B-27 supplement without Vitamin A,serum free,50X B-27無血清添加劑,50X

60704ES

10 mL

B-27 supplement, minus antioxidants, serum free,50X B-27 無血清添加劑,無抗氧化劑,50X

60705ES

10 mL

HEPES Free Acid?細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)

60110ES

100 g/500 g

L-alanyl-L-glutamine solution,200mM L-丙氨-L-谷氨酰胺,200mM

60701ES

20 mL/100 mL/500 mL

Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture?細(xì)胞培養(yǎng)用青霉素-鏈霉素(雙抗)

60162ES

100 mL

Ceturegel™ Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠

40183ES

5 mL/10 mL


小分子化合物(抑制劑/激活劑)

 

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

Y-27632

53006ES

1 mg/5 mg/10 mg

MK-2206 2HCl

53008ES

1 mg/5 mg/10 mg

GDC-0068(Ipatasertib; RG7440; GDC0068)

53009ES

1 mg/5 mg/10 mg

Dorsomorphin?dihydrochloride?

(Dorsomorphin 2HCl)

53010ES

1 mg/5 mg/10 mg

Y-27632 dihydrochloride

52604ES

5 mg/10 mg/25 mg


細(xì)胞因子

 

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

Recombinant Human DKK-1

92275ES

20 μg/100 μg/500 μg

Recombinant Human EGF

92701ES

100 μg/500 μg

Recombinant Human bFGF

91330ES

10 μg/100 μg/500 μg

Recombinant Human GDNF

92102ES

10 μg/100 μg/500 μg

Recombinant Human Noggin

92528ES

5 μg/100 μg/500 μg

Recombinant Human BDNF

92129ES

5 μg/20 μg/100 μg



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