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康寧基底膜基質(zhì)可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細(xì)胞，厚層凝膠法允許您在三位基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復(fù)雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養(yǎng)細(xì)胞。您的選擇基于您想要實(shí)現(xiàn)的最終結(jié)果，無(wú)論是細(xì)胞生長(zhǎng)、附著還是分化。
薄層凝膠法
1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2. 將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 µl/cm2向生長(zhǎng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
3 將培養(yǎng)板放置在 37 °C ，30 分鐘。
4. 如果有必要的話，請(qǐng)?jiān)谑褂脽o(wú)血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請(qǐng)確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
厚層凝膠法
1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2. 將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細(xì)胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200 µl/cm2向生長(zhǎng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
3. 將培養(yǎng)板放置在 37°C，30 分鐘?，F(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細(xì)胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。
薄層包被法
1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2. 使用無(wú)血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對(duì)于您的應(yīng)用程序，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。
3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個(gè)小時(shí)。
4. 吸出未結(jié)合的材料并使用無(wú)血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
細(xì)胞復(fù)蘇：
康寧中性蛋白酶(貨號(hào) 354235)，康寧細(xì)胞復(fù)蘇溶液(貨號(hào) 354253)。使用康寧細(xì)胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內(nèi)解聚康寧基底膜基質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長(zhǎng)在康寧基底膜基質(zhì)上的細(xì)胞有效地復(fù)蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細(xì)胞。
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