鼠抗人Bcl-0單克隆抗體操作步驟:

1 . 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行

⒉ 緩沖液洗  3min/2  次。

⒊ 為了降低內(nèi)源性過(guò)氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分鐘。

⒋ 緩沖液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室溫下孵育  5  分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過(guò)  10  分鐘,否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有  5  -  10%  正常羊血清,這一步可以省略。)

⒍ 緩沖液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者最終決定)

⒏ 緩沖液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增強(qiáng)子),在室溫下孵育  20  分鐘。

10  .緩沖液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育  30  分鐘。

(注: HRP Polymer  對(duì)光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)

12  .緩沖液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。)

14  .自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染 ,脫水,透明,封片。

NCI-H661(人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

M-NFS-60 (小鼠白血病細(xì)胞G-CSF依賴性)

PA319(人大腸癌細(xì)胞)

PATU8988(人胰腺癌細(xì)胞)

PC-3M(人前列腺癌細(xì)胞)

SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)

SMC-1(人胸膜瘤細(xì)胞)

SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)

TE-13(人食管癌細(xì)胞)

TG-905(人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

VE(人血管內(nèi)皮細(xì)胞)

MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞)

WTRL1(大鼠肺細(xì)胞)

Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)

293E(人胚腎細(xì)胞（EBNA1基因修飾）)

293ET(人胚腎細(xì)胞（SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞）)

293FT(人胚腎細(xì)胞)

2V6.11(人胚腎細(xì)胞)

A3(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)

A7r5(大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞)

AML-193(人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞)

B16-F1(小鼠黑色素瘤細(xì)胞)

B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞)