ArcticExpress（DE3）pRARE2 感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(mouse TIMP-2)

小鼠腫瘤壞死因子-a(mouse TNF-a)

小鼠腫瘤壞死因子-b(mouse TNF-b)

小鼠腫瘤壞死因子-r(mouse TNF-r)

小鼠組織纖溶酶原激活劑(mouse t-PA)

小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(mouse Transferrin)

小鼠胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(mouse TSLP)

小鼠血栓烷B2(mouse TXB2)

小鼠可溶性腫瘤壞死因子-a受體(mouse sTNF-aR)

小鼠組織多肽抗原(mouse TPA)

小鼠血小板生成素(mouse TPO)

小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(mouse TRAIL/APO 2L)

小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體1(mouse TRAIL R1)

小鼠凝血酶敏感蛋白-1(mouse TSP-1)

小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(mouse TM)

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(mouse uPA)

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(mouse uPA-R)

小鼠血管細(xì)胞粘附分子-1(mouse sVCAM-1)

小鼠血管內(nèi)皮生長因子(mouse VEGF)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(mouse VEGF-B)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(mouse VEGF-C)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D(mouse VEGF-D)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(mouse VEGF-R1)