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貼壁細(xì)胞總有部分圓形或者漂浮的是正常情況嗎?

來源:蒂科(上海)生物科技有限公司   2022年06月16日 09:44  

大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細(xì)胞存在,也會有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在,這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞,只要細(xì)胞持續(xù)增殖,都會有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞,不影響細(xì)胞整體增殖和實(shí)驗,保持正常換液、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫不同細(xì)胞照片比對,大部分貼壁細(xì)胞都會有圓形細(xì)胞、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況。

如何消除組織培養(yǎng)的污染?

當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實(shí)驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查 HEPA 過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素 B 和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗步驟。

1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。

2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素 B 推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

3)每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。

4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度 2-3 倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞 2-3 代。

5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。

6)重復(fù)步驟 4。

7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 4-6 代,確定污染是否以已被消除。



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