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GB31658.17-2021多獸殘?zhí)幚矸桨附榻B

來源:北京中檢維康生物技術(shù)有限公司   2022年06月16日 10:52  

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樣品提取

準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的肉類樣品1g(精確至 0.01 g)于干凈離心管中,加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液,渦旋混勻后超聲提取 20 min,-5℃下 120000 r/min 離心 5 min,取出上清液于另一干凈離心管,試樣殘渣加入 8 mL 磷酸鹽緩沖液,同上述操作,合并兩次提取液,-5℃下 120000 r/min 離心 5 min,上清液待凈化。
Mcllvaine-Na2EDTA 緩沖液:取檸檬酸·一水 12.9g、磷酸氫二鈉·十二水 10.9g、乙二胺四乙酸二鈉·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 至 5.0±0.2,用水稀釋至 1000mL。
磷酸鹽緩沖液:取 0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至 1000mL。
樣品凈化
活化:固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。(Clover HLB,200mg/6mL)
上樣:取上述待凈化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗:依次用 5 mL 水,5 mL 5%甲醇-水溶液,抽干。
洗脫:用 8 mL 甲醇:乙酸乙酯:氨水=50:50:2 溶液進(jìn)行洗脫。
收集全部洗脫液,45℃下氮吹至 100 μL 左右,加入 0.1%甲酸溶液定容至1mL,過 PTFE 親水濾膜,上機(jī)測試。
基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備
取 6 個(gè)空白基質(zhì)樣品同正常樣品一樣操作,收集洗脫液后,于洗脫液中分別加入適量標(biāo)液,再與其他樣品洗脫液一同氮吹,定容,使最終上機(jī)溶液的濃度分別為 2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。

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儀器條件

(1)色譜條件
儀器:UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)
色譜柱:Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm,1.9 μm)
流動(dòng)相:A:水(0.1 %甲酸) B:甲醇:乙腈=2:8(0.1 %甲酸)
洗脫方式:梯度洗脫,見表 1
流速:0.3 mL/min
柱溫:35℃
進(jìn)樣量:10 μL
(2)質(zhì)譜條件
子源:HESI
電噴霧電壓:3500 V
鞘氣壓力:40 arb
輔氣壓力:2 arb
離子傳輸管:380 ℃
輔氣溫度:350 ℃


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