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多肽固相合成技術(shù)的發(fā)明有效促進(jìn)了多肽合成的自動(dòng)化。20世紀(jì)80年代初期出現(xiàn)的第一臺(tái)真正的多肽合成器，利用氮?dú)夤呐輸嚢璺磻?yīng)物，通過計(jì)算機(jī)程序控制實(shí)現(xiàn)了有限的自動(dòng)合成。雖然各功能方面都有明顯的缺陷，但它畢竟把人從實(shí)驗(yàn)室里解放出來，大大提高了工作效率。
隨著多肽科學(xué)的發(fā)展，科學(xué)家也對(duì)合成器提出了更高的要求，從而帶動(dòng)了合成器的發(fā)展。多肽合成儀非常適合合成具有一定難度和長(zhǎng)度的多肽，被高校、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)廣泛應(yīng)用于一般的多肽研究、多肽藥物和疫苗的開發(fā)、藥證申請(qǐng)等。多肽的合成實(shí)現(xiàn)全過程自動(dòng)調(diào)控，氨基酸和試劑的添加、攪拌速度、反應(yīng)時(shí)間等可通過模塊化程序設(shè)定。
多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理，在密閉防爆玻璃反應(yīng)器中按已知順序〔序列，一般為C端羧基末端至N端氨基末端〕不斷添加、反應(yīng)、合成、操作最終得到多肽載體。固相合成法大大減少了每一步產(chǎn)品精制的難度。為了防止副反應(yīng)，參與反應(yīng)的氨基酸側(cè)鏈都受到保護(hù)。羧基末端是游離的，在反應(yīng)之前必須活化。固相合成方法有Fmoc和tBoc兩種。由于Fmoc比tBoc有更多的優(yōu)勢(shì)，目前多采用Fmoc法合成，但對(duì)于部分短肽，tBoc以其產(chǎn)率高的優(yōu)勢(shì)仍然被許多企業(yè)采用。
多肽合成儀合成步驟。
1、脫保護(hù)：受Fmoc保護(hù)的柱和單體必須用堿性溶劑(piperidine)去除氨基保護(hù)基團(tuán)。
2、活化與交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被活化劑活化。被活化的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián)，形成肽鍵。在這一步中，使用大量的超濃度試劑促進(jìn)反應(yīng)。循環(huán)：這兩個(gè)階段的反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。
3、洗脫保護(hù)：多肽從色譜柱上洗脫，其保護(hù)基受一種脫保護(hù)劑(TFA)洗脫保護(hù)。
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