国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

Ficoll密度梯度離心法分離PBMC

來源:匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司   2022年06月28日 11:41  

外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)、單核細(xì)胞(Monocyte)、樹突狀細(xì)胞(DC)和其他少量細(xì)胞。

1     原理

單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與外周血其它細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞的比重超過1.080,單個(gè)核細(xì)胞的比重為1.070左右,血小板為1.030左右。因此,可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開來。

Ficoll密度梯度離心法是分離、純化PBMC的方法。Ficoll是蔗糖的多聚體,中性,平均分子量400000,當(dāng)密度為1.2g/mL,未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜,故常用作PBMC分離的分離液。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分離液比重,離心后漂浮于分離液的液面上,也可有少部分細(xì)胞懸浮在分離液中。吸取分層液液面上的白膜層細(xì)胞,并進(jìn)行適當(dāng)?shù)那逑?,就可從外周血中分離到較高純度的單個(gè)核細(xì)胞,即PBMC。

2     方法

1) 取新鮮抗凝全血,按照1:1比例加入1×稀釋洗滌液,將血液進(jìn)行稀釋(以降低血液粘稠度),輕柔混勻,備用。

2) 向無菌離心管內(nèi)加入適量的單個(gè)核細(xì)胞分離液,將稀釋后的血樣平鋪到分離液液面上方(分離液:稀釋全血=1:2),保持兩液面界面清晰。 

3) 800g,室溫,離心 20min-30min(注:設(shè)置較慢的加速度和減速度,如果有十檔,設(shè)為第三檔)。 

4) 離心結(jié)束后,吸棄血漿層,小心吸取PBMC層(即白膜層)并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后,管內(nèi)液面從上至下依次為稀釋血漿層、PBMC層、分離液層和紅細(xì)胞層(見圖1)。 

圖1 稀釋外周血離心前后的分層狀態(tài)圖

5) 向離心管中加入10mL 的1×稀釋洗滌液重懸細(xì)胞,250g,室溫離心 10min ,棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次,即可用于后續(xù)試驗(yàn)。

3     注意事項(xiàng)

1) 不同種屬動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞的比重有一定差異,請選擇合適的分離液進(jìn)行PBMC的分離。

2) 血液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,請盡量使用采集后24h內(nèi)的血液進(jìn)行PBMC分離。

3) 為保證細(xì)胞的活力,整個(gè)操作過程請輕柔,避免對細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

4) 為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,請盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期。

4     相關(guān)產(chǎn)品

關(guān)    于    我    們


匯智和源,致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
巴东县| 万州区| 浦江县| 邹城市| 富平县| 新干县| 河北省| 洱源县| 揭阳市| 英超| 枝江市| 德格县| 竹北市| 柏乡县| 珠海市| 晋宁县| 巫山县| 安仁县| 平舆县| 民权县| 栾川县| 洪雅县| 丁青县| 宁强县| 会理县| 溆浦县| 阿尔山市| 舟山市| 台中市| 昭觉县| 徐汇区| 陕西省| 永城市| 石景山区| 紫金县| 新余市| 会理县| 楚雄市| 和平区| 星子县| 龙陵县|