體外轉(zhuǎn)錄（IVT）mRNA被廣泛用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用，為快速和可控地誘導(dǎo)目標(biāo)蛋白提供了一個有前途的基因表達(dá)系統(tǒng)?；谄浒踩院透咝?，IVT mRNA是一種強(qiáng)大的方法，在再生醫(yī)學(xué)、疫苗接種、細(xì)胞工程和蛋白質(zhì)替代療法中具有潛在的應(yīng)用。具有內(nèi)部表觀遺傳修飾的IVT RNA合成需要DNA模板、酶、核苷酸和緩沖劑成分。不熟悉IVT mRNA技術(shù)或?qū)ふ铱焖俣行У姆?wù)？

艾美捷 Abnova有較為豐富的IVT mRNA服務(wù)，包括DNA模板生產(chǎn)、mRNA生產(chǎn)和mRNA質(zhì)量控制。

艾美捷 Abnova IVT mRNA工作流程：

從幾百個堿基到幾千個堿基的定制mRNA

優(yōu)化的mRNA合成和純化程序

無細(xì)胞生產(chǎn)，無有毒化學(xué)品

合格的RNA以滿足客戶需求

可用于大多數(shù)的下游應(yīng)用

艾美捷 Abnova IVT合成mRNA的服務(wù)細(xì)節(jié)：

1、DNA模板的生產(chǎn)

擴(kuò)增感興趣的基因*并將其克隆到表達(dá)載體上

質(zhì)粒DNA的制備和純化

線性化的DNA制備

2、mRNA生產(chǎn)

線性化的DNA制備

線性化DNA的體外轉(zhuǎn)錄成RNA

RNA加帽

加帽的RNA純化和定量**

3、mRNA質(zhì)量控制

完整性和純凈度：RNA的瓊脂糖凝膠電泳

蛋白質(zhì)的表達(dá): RNA轉(zhuǎn)染到細(xì)胞，細(xì)胞裂解液進(jìn)行Western blot分析。

加冒方法：

共同轉(zhuǎn)錄修飾

序列 RNA 序列 加帽順序 帽類似物

Cap 0 GAUG 3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')GAUG Anti-Reverse

GTP competition

Cap 1 AUG m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pUG Without Anti-Reverse

Without GTP competition

Cap 1 AGG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeG)pGG Anti-Reverse

Without GTP competition

Cap 1 GGG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pGG Anti-Reverse

GTP competition

核苷的修飾：

Pseudouridine (Ψ)

5-methylcytidine (m5C)

N1-methylpseudouridine (N1mΨ)

Abnova通過基因組學(xué)手段生產(chǎn)出的幾萬種重組蛋白和抗體，J大的擴(kuò)展了生物試劑應(yīng)用的視野和多樣性。致力于推動生命科學(xué)研究發(fā)展與藥物研發(fā)等領(lǐng)域。艾美捷科技是Abnova的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。