產(chǎn)品簡介：

血紅蛋白(Hemoglobin，Hb 或 HGB)是高等生物體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)載氧的一種蛋白質(zhì)，是能使血液呈紅色的蛋白，血紅蛋白由四條鏈組成，兩條α鏈和兩條β鏈，每一條鏈有一個(gè)包含一個(gè)鐵原子的環(huán)狀血紅素，Hb 在氧含量高的區(qū)域容易與氧結(jié)合，在氧含量低的區(qū)域又容易與氧分離，血紅蛋白的這一特性，使紅細(xì)胞具有運(yùn)輸氧的功能，血管溶血時(shí)血漿游離血紅蛋白(free hemoglobin)濃度增高。

 游離血紅蛋白檢測(cè)試劑盒( 鄰聯(lián)甲苯胺比色法)(Free Hemoglobin Colorimetric Assay Kit)檢測(cè)原理是血紅蛋白中亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的作用，可在氧化劑的作用下催化鄰聯(lián)甲苯胺(O-tolidine)產(chǎn)生青色或藍(lán)色產(chǎn)物，吸收峰在 630nm；在酸性條件下產(chǎn)物呈黃色，吸收峰在 435nm，產(chǎn)物黃色越深，說明 FHB 含量越高，反之越低； 通過分光光度比色法測(cè)定 435nm 處吸光度，就可計(jì)算出血漿游離血紅蛋白含量，主要用于血漿樣本，亦可用于測(cè)定細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液等樣品中游離血紅蛋白含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成： 

自備材料：

1、96 孔板、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

2、生理鹽水或蒸餾水

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：

①血漿、尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，尿液通    常也可以直接用于測(cè)定，獲得的樣品-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)?shù)募?xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，低速離心取

上清，獲得的樣品-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

2、配制 Hb 標(biāo)準(zhǔn)品工作液：取 Hb(1mg/ml) 10μl 加入 90μl 生理鹽水，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液(100μg/ml)。

3、FHB 加樣：取 96 孔板或 EP 管，按照下表設(shè)置空白孔/管、標(biāo)準(zhǔn)孔/管、測(cè)定孔/管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡；如果樣品中的血紅蛋白含量過低，可以增加    各管用量(0.02 增加到 0.1 或其他用量，保證各管體積一致即可）；如果樣品中的血紅蛋白含量過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行孔/管， 尤其是標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)作 3 復(fù)孔/管。

4、FHB 測(cè)定：空白調(diào)零，以分光光度計(jì)測(cè)定 435nm 處標(biāo)準(zhǔn)孔/管和測(cè)定孔/管的吸光度， 如果無法檢測(cè) 435nm，亦可檢測(cè) 425～450nm 范圍內(nèi)吸光度。

 計(jì)算結(jié)果：

血漿游離血紅蛋白(mg/L)=測(cè)定吸光度/標(biāo)準(zhǔn)吸光度×100(mg/L)，一般＜40mg/ml

 注意事項(xiàng)：

1、 Hb(1mg/ml)為市售的牛血紅蛋白與生理鹽水配制而成的，未用 HiCN 標(biāo)定其濃度，可能有一定誤差，有特殊需求的可以自備相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品。

2、 Hb(1mg/ml)和標(biāo)準(zhǔn)品工作液(100μg/ml)均應(yīng) 4℃保存，同時(shí)應(yīng)避免污染。

3、 也可用酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)根據(jù)酶標(biāo)儀的最大檢測(cè)體積進(jìn)行調(diào)整。

4、 本反應(yīng)比較快，加入 Acid Assay Buffer 和蒸餾水后應(yīng)立即檢測(cè)，一般 30min 內(nèi)顏色變化不大，但應(yīng)保證不同批次實(shí)驗(yàn)用相同的檢測(cè)時(shí)間。

5、 O-tolidine Solution 和 Acid Assay Buffer 有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作，避免直接接觸身體。

6、 氧化劑含有少量的過氧化氫，使用后應(yīng)及時(shí)擰緊瓶蓋，如果反應(yīng)不變化，可考慮重新配制本氧化劑溶液(0.05%水溶液即可）。

7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。