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LB培養(yǎng)基的分類與倒板

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2022年07月12日 09:04  

LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,生化分子實(shí)驗(yàn)中一般用該培養(yǎng)基來預(yù)培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴(kuò)增,達(dá)到使用要求。也可用于培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌)??煞譃?/span>液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。LB一般被解釋為Luria-Bertani培養(yǎng)基,然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說法,這個(gè)名字來源于英語的lysogeny broth,即溶菌肉湯。

肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種廣泛用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基。而LB培養(yǎng)基則是一種近年來用于培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌)的常用培養(yǎng)基。兩者都屬于半合成培養(yǎng)基。肉膏蛋白胨的培養(yǎng)基主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。而LB培養(yǎng)基的主要成分是胰蛋白胨、酵母提取物和NaCl。高氏合成一號(hào)培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的可溶性淀粉作為碳源和能源。

分類

液態(tài)培養(yǎng)基

根據(jù)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基,應(yīng)該在950 ml去離子水中加入:

胰蛋白胨10g

酵母提取物5g

NaCl 10g

搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0.用去離子水定容至1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.

培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨(dú)存活和擴(kuò)增的工程菌.通過培養(yǎng)工程菌,我們可以表達(dá)大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒,工程菌的有效擴(kuò)增是生化分子實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ).

LB培養(yǎng)基的配方如下:

胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L

酵母提取物(Yeast extract) 5g/L

氯化鈉(NaCl) 10g/L

另外根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.4(該pH適合使用*的原核表達(dá)菌種E.coli的生長)

固態(tài)培養(yǎng)基

LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣,加15g~20g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。

倒板

1.配制:100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉

2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(shí)(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效,并充分搖勻。

3.倒板:一般15ml-20ml倒1個(gè)板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。

4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個(gè)月內(nèi)使用。

ph值需要控制在7.4



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