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推“柱”之薦 | 配方顆粒色譜柱推薦之車前子檢測(cè)

來源:安捷倫科技(中國)有限公司   2022年07月12日 17:07  


在上期內(nèi)容中,我們重點(diǎn)為大家介紹并推薦了適用于中草藥檢測(cè)的各類安捷倫色譜柱,以便大家在日后的檢測(cè)工作中匹配使用。本期繼續(xù)帶來適用于車前子配方顆粒檢測(cè)的色譜柱推薦,跟上我們,精彩繼續(xù)!


本實(shí)驗(yàn)選用的色譜柱 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 采用 Agilent 專有的表面多孔型填料技術(shù), 其 2.7 μm 色譜柱的分離速度和分離度能媲美亞二微米全多孔類型的色譜柱,但柱壓僅有其一半。同時(shí)柱頭采用較大的 2 μm 篩板能耐受更“臟”的樣品,有利于提高色譜柱的耐受性。特征譜圖采用的 Poroshell 120 EC-C18(2.1x100mm, 2.7μm) 色譜柱,測(cè)試結(jié)果*符合標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。


根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局 《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中車前子配方顆粒的檢測(cè)項(xiàng)目,對(duì)其特征譜圖和含量測(cè)定都采用超高效液相色譜法。特征譜圖測(cè)定中要求理論板數(shù)按京尼平苷酸峰計(jì)算應(yīng)不低 3000,供試品呈現(xiàn)的特征峰保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品相對(duì)應(yīng)。含量測(cè)定中規(guī)定了理論板數(shù)按京尼平苷酸峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000。本文采用 Infinity 1290 超高效液相色譜儀以及 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 2.1x100mm, 2.7μm 色譜柱對(duì)車前子配方顆粒的特征譜圖進(jìn)行了分析,并對(duì)車前子配方顆粒中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行了測(cè)定。此外,我們也對(duì)該方法進(jìn)行了加速,能夠?qū)崿F(xiàn)更快速的分析。


1、 特征譜圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖片

圖 1. 車前子配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照譜圖與替代方法中供試品特征譜圖(包括標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法)的比較 (峰 2(S):京尼平苷酸)


色譜條件:  

標(biāo)準(zhǔn)方法:  

流動(dòng)相:A:CH3OH;B:0.3%醋酸水  

梯度:0-0.2min,95%B;0.2-8min,95%B-40%B;8-10min,40-95%B;10-15min,95%B  

流速:0.3ml/min  

柱溫:30°C  

檢測(cè)波長:245nm(4nm),Ref:off;采樣頻率:20Hz  

進(jìn)樣量:2μL  


加速方法:  

梯度:0-0.1min,95%B;0.1-4min,95%B-40%B;4-5min,40-95%B;5-7.5min,95%B  

流速:0.6ml/min  

其余同上。


系統(tǒng)適用性結(jié)果見下表:

圖片


結(jié)果

1)使用Poroshell色譜柱,能準(zhǔn)確定位供試品中的4個(gè)特征峰;供試品色譜圖中,未出現(xiàn)與車前子苷對(duì)照品參照物峰保留時(shí)間一致的色譜峰。

2)標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法的理論板數(shù)按京尼平苷酸峰計(jì)算分別為 38475 和 37988,大于規(guī)定值 3000,結(jié)果符合要求。

3) 使用加速方法加速分析后,分析時(shí)間縮短 7.5 分鐘(50% 時(shí)間節(jié)省)。


2、 含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖片

圖 2. 車前子配方顆粒供試品含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方法和替代方法譜圖對(duì)照


色譜條件:

標(biāo)準(zhǔn)方法:  

流動(dòng)相:A:CH3OH;B:0.5%醋酸水  

梯度:0-0.2min,95%B;0.2-10min,95%B-40%B;10-10.1min,40-95%B;10.1-15min,95%B  

流速:0.3ml/min  

柱溫:30°C  

檢測(cè)波長:245nm(4nm),Ref:off;采樣頻率:20Hz  

進(jìn)樣量:2μL  


加速方法:  

梯度:0-0.1min,95%B;0.1-5min,95%B-40%B;5-5.05min,40-95%B;5.05-7.5min,95%B  

流速:0.6ml/min  

其余同上。


系統(tǒng)適用性結(jié)果見下表:

圖片


結(jié)果

1)使用該方法測(cè)定京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量,京尼平苷酸的理論板數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定。

2)通過提高一倍流速,可加速分析方法,分析時(shí)間縮短至 7.5 min(50%時(shí)間節(jié)省)。


實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色譜柱對(duì)車前子配方顆粒特征譜圖及含量進(jìn)行了檢測(cè),均符合標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)系統(tǒng)適用性的要求。本方法可用于車前子配方顆粒的分離和檢測(cè),為該配方顆粒的質(zhì)量保證提供檢測(cè)依據(jù)。


儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦

1290 四元 UHPLC 系統(tǒng):全能泵(G7104A),自動(dòng)進(jìn)樣器(G7167B),柱溫箱(G7116B),DAD(G7117B)

圖片

其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集,或聯(lián)系 Agilent。




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