Agilent 在 2003 年首家推出了亞 2 微米粒徑的色譜柱，由此掀開了超高效液相色譜分離（UHPLC）的序幕。ZORBAX 系列的 UHPLC 色譜柱中，分為快速高通量分離（RRHT）和超高壓快速高分離度（RRHD）兩個(gè)系列，高壓力耐受分別為 600bar 和 1200bar。ZORBAX Plus C18 和 SB C18 RRHD 是中藥配方顆粒中常用 UHPLC 色譜柱。本實(shí)驗(yàn)選用的色譜柱 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD，其固定相表面通過致密鍵合和雙封端處理，對中藥中生物堿、皂苷、黃酮、萜類等成分具有優(yōu)異的峰形和分離度。

根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局 《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中淡竹葉配方顆粒的檢測項(xiàng)目，對其特征譜圖和含量測定都采用 UHPLC 方法。特征譜圖測定中要求理論板數(shù)按異葒草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 10000，供試品呈現(xiàn)的特征峰保留時(shí)間應(yīng)與對照品相對應(yīng)。含量測定中規(guī)定了理論板數(shù)按異葒草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 10000。本文采用 1290 Infinity II 超高效液相色譜儀以及 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD, 2.1x100mm, 1.8μm 色譜柱對淡竹葉配方顆粒的特征譜圖進(jìn)行了分析，并對淡竹葉配方顆粒中異葒草苷的含量進(jìn)行了測定。此外，我們也對該方法進(jìn)行了加速，能夠?qū)崿F(xiàn)更快速的分析。

圖1. 淡竹葉配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)對照譜圖與替代方法中供試品特征譜圖(包括標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法)的比較 （峰 2(S):異葒草苷；峰 3:日當(dāng)藥黃素）

色譜條件：

標(biāo)準(zhǔn)方法：

?

流動(dòng)相：A：乙腈；B：H₂O（0.2%磷酸）

?

梯度：0-4 min，95 %-92%B；4-25 min，92%B-85%B；25-30min，85-25 %B；后運(yùn)行，7min

?

流速：0.25ml/min

?

柱溫：40 °C

?

檢測波長：350 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率：20Hz

?

進(jìn)樣量：1 μL

加速方法：

?

梯度：24 min，95 %-92%B；2-12.5 min，92%B-85%B；12.5-15min，85-25 %B；后運(yùn)行，3.5min

?

流速：0.5ml/min

?

其余同上。

系統(tǒng)適用性結(jié)果見下表：

結(jié)果

1）使用 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱，能準(zhǔn)確定位標(biāo)準(zhǔn)中要求的 4 個(gè)特征峰，且相對保留時(shí)間（RRT）在標(biāo)準(zhǔn)要求范圍內(nèi)。

2）標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法的理論板數(shù)按京異葒草苷峰計(jì)算分別為 124514 和 94893，大于規(guī)定值 10000，結(jié)果符合要求。

3） 使用加速方法加速分析后，分析結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，且分析時(shí)間縮短至原來的 50%。

2

含量測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2. 淡竹葉配方顆粒供試品含量測定標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法譜圖對照

色譜條件：

同特征圖譜標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法。

系統(tǒng)適用性結(jié)果見下表：

結(jié)果

1）使用該方法測定異葒草苷的含量，其理論板數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

2）通過提高一倍流速，可加速分析方法，提高檢測效率(50% 時(shí)間節(jié)省)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)選用 ZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱對淡竹葉配方顆粒特征譜圖及含量進(jìn)行了檢測，均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。原方法流速較低（0.25ml/min），分析時(shí)間較長。通過提升流速，分析效率提高 1 倍，且相對保留時(shí)間、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果*要求。

儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦

1290 Infinity II 四元 UHPLC 系統(tǒng)：全能泵(G7104A)，自動(dòng)進(jìn)樣器(G7129B)，柱溫箱(G7116B)，DAD(G7117A)

其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集，或聯(lián)系 Agilent。