基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白EHS小鼠腫瘤中提取出的可溶性基底膜制備物，其主要成分由層粘連蛋白，Ⅳ型膠原，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等組成，還包含生長因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、組織纖溶酶原激活物和EHS腫瘤自身含有的其他生長因子。

在1980年代中期由丹麥的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分別發(fā)現(xiàn)并具體描述基質(zhì)膠^【1】，其主要生產(chǎn)過程是用鹽水提取/洗滌腫瘤勻漿后可溶性蛋白質(zhì)，再用溶劑萃取產(chǎn)物中不溶性復(fù)合物，在低溫下使用緩沖液進(jìn)行透析后獲得無色到淡黃色溶液。

表：基質(zhì)膠組分^【1】

基質(zhì)膠為組織和細(xì)胞提供支撐、抗拉強(qiáng)度和支架支撐，也可以作為細(xì)胞粘附和運(yùn)動的三維亞結(jié)構(gòu)以及生長因子、趨化因子和細(xì)胞因子的儲存庫，同時可作為細(xì)胞形態(tài)發(fā)生和分化的信號等。

翌圣生物開發(fā)生產(chǎn)的CeturegelTM基質(zhì)膠不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒），超低內(nèi)毒素含量，并全部經(jīng)過支原體檢測保證無支原體污染，包括基本濃度、高濃度、低生長因子等不同類型基質(zhì)膠。 

應(yīng)用方向

產(chǎn)品特點

特點：

• 安全性高：不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒）

• 濃度多樣性：濃度范圍在8~20 mg/ml之間

• 批次穩(wěn)定性好：嚴(yán)格生產(chǎn)質(zhì)檢過程保證批次間性能穩(wěn)定

• 低內(nèi)毒素：內(nèi)毒素含量≤4 EU/ml

• 污染物檢測： 經(jīng)檢測無支原體和細(xì)菌、真菌殘留

• 單批產(chǎn)量高：單批產(chǎn)量在L級別以上

• 兼容性好：可與任何類型的細(xì)胞培養(yǎng)基兼容
  
  
  

遷移侵襲驗證

圖：遷移侵襲實驗過程

1 基質(zhì)膠鋪板

首先將拿到的CeturegelTM基質(zhì)膠凍融后按照原液1:8用無血清培養(yǎng)基稀釋（終濃度不要超過3mg/ml）來包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30min使CeturegelTM基質(zhì)膠聚合成凝膠，使用前進(jìn)行基底膜水化。

2 制備細(xì)胞懸液

1將細(xì)胞饑餓12-24h以去除血清的影響（可選）。

2消化細(xì)胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液并用PBS洗1-2次，用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸調(diào)整細(xì)胞密度至4×104~2×105個/ml。

3 細(xì)胞接種

1取細(xì)胞懸液100μl加入Transwell小室。

2在24孔板下室加入600μl含20%FBS培養(yǎng)基，添加時要避免下層培養(yǎng)液和小室間產(chǎn)生氣泡，產(chǎn)生氣泡易使下層培養(yǎng)液的趨化作用減弱甚至消失。

3培養(yǎng)細(xì)胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(時間主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定)。

4 結(jié)果統(tǒng)計

1取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用不含鈣的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定30分鐘，將小室適當(dāng)風(fēng)干。

2然后使用0.1%結(jié)晶紫染色20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，用PBS洗3遍于400倍顯微鏡下隨即五個視野觀察細(xì)胞，記數(shù)。

圖：細(xì)胞侵襲后經(jīng)結(jié)晶紫染色的結(jié)果

FAQ

Q1拿到的基質(zhì)有色差的變化（淡黃色到深紅色）是什么原因？

A對于含酚紅的基質(zhì)膠主要原因是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的，但是與5％CO2平衡后色差即會減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使基質(zhì)膠分散均勻。

Q2基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項？

A所有操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

Q3基質(zhì)膠的如何分裝凍存使用？

A可將凍融后的CeturegelTM基質(zhì)膠分裝在多個小管，所有分裝均需用預(yù)冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。所有涉及到使用的物品在使用前需預(yù)冷，使用預(yù)冷的移液管、吸頭及小管等操作基質(zhì)膠。

[1] Kleinman H K ,  Martin G R . Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.

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