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遠慕分享生物實驗中常用電泳方法

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2022年07月27日 11:41  

 一、紙電泳 

指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。

將濾紙條水平地架設(shè)在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進行電泳。

二、醋酸纖維素薄膜電泳

電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。

三、凝膠電泳

由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進行電泳的方式。

凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯/酰胺凝膠電泳是普通電泳中應(yīng)用最多的兩種形式。

目前,這種辦法被廣泛用來分析蛋白質(zhì)和核酸。

四、等電聚焦電泳

1.等電聚焦電泳過程  

一種利用有pH值梯度的介質(zhì),分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。

在一個穩(wěn)定連續(xù)的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質(zhì))中進行分離,每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電點相一致的pH位置,在那里不再移動(稱為聚焦)。

2.等電聚焦電泳的特點

①使用兩性載體電解質(zhì),在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度;

②由于“聚焦效應(yīng)”,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面;

③電泳速度快;④分辨率高;

⑤加入樣品的位置可任意選擇;

⑥可用于測定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點;

⑦適用于中、大分子量(如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。

五、等速電泳

采用兩種不同濃度的電解質(zhì),一種為前導(dǎo)電解質(zhì),充滿整個毛細管柱;另一種為尾隨電解質(zhì),置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分,尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強電場的作用下,各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動,實現(xiàn)分離。

六、雙向凝膠電泳(二維電泳)

第一向采用等電聚焦 根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個蛋白質(zhì)的PI的不同,將蛋白質(zhì)進行分離。

第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯/酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結(jié)果不再是條帶狀,而是呈現(xiàn)為斑點狀。

七、免疫電泳

免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開;然后加入抗體做雙相免疫擴散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇,在二者比例適當?shù)牡胤?,形成肉眼可見的沉淀弧?/p>

 

 

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