辣根過氧化酶使試劑中的發(fā)光物（luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強劑這使得發(fā)光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)sds-page分離，并轉(zhuǎn)移到固相膜上（如nc、pvdf）等，用于免疫學(xué)檢測，經(jīng)HRP標(biāo)記的抗體與膜上的蛋白直接（標(biāo)記一抗）或間接（標(biāo)記二抗）反應(yīng)。

 原理

 辣根過氧化酶使試劑中的發(fā)光物（luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強劑這使得發(fā)光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)sds-page分離，并轉(zhuǎn)移到固相膜上（如nc、pvdf）等，用于免疫學(xué)檢測，經(jīng)HRP標(biāo)記的抗體與膜上的蛋白直接（標(biāo)記一抗）或間接（標(biāo)記二抗）反應(yīng)。當(dāng)加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光試劑后，luminol發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長為428nm的光，此光可經(jīng)x光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。

用途

非放射性發(fā)光系統(tǒng)，用于檢測固定在膜上的蛋白，其敏感性達1-5pg。用x光片可快速地獲得永.久的硬拷貝結(jié)果。所含獨.特的底物足以維持12小時以上的發(fā)光，便于反復(fù)曝光操作，免疫印跡膜經(jīng)抗體脫卸處理后可供再次抗體探查使用。適用于痕量蛋白或核酸檢測。

使用方法

1. 印跡膜制備 按常規(guī)方法完成SDS-PAGE和電轉(zhuǎn)膜操作，適當(dāng)?shù)姆忾]非常重要。可以通過標(biāo)記一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯(lián)物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要，在與HRP交聯(lián)物溫育后，膜片更需仔細洗滌，所有步驟均在室溫下完成。