（試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷?。?/span>

人β2糖蛋白1第一結(jié)構(gòu)域抗體（hrβ2GPⅠDⅠ）ELISA KIT

使用說(shuō)明書

●指標(biāo)名稱：人β2糖蛋白1第一結(jié)構(gòu)域抗體（hrβ2GPⅠDⅠ）酶聯(lián)免疫試劑盒

●規(guī)格：96T/48T

●保質(zhì)期：6個(gè)月（具體請(qǐng)見試劑盒外包裝標(biāo)簽）

●用途：試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中人β2糖蛋白1第一結(jié)構(gòu)域抗體（hrβ2GPⅠDⅠ）濃度。

●靈敏度：1 ng/mL 

●特異性：檢測(cè)樣本中的人β2糖蛋白1第一結(jié)構(gòu)域抗體（hrβ2GPⅠDⅠ），與其類似物無(wú)明顯交叉反應(yīng)。

●重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均 < 15%。

使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書。如果有任何疑問(wèn)，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我司相關(guān)人員。聯(lián)系時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┊a(chǎn)品批號(hào)，以便我們更高效的為您服務(wù)。

檢測(cè)原理：

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人hrβ2GPⅠDⅠ捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人hrβ2GPⅠDⅠ呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。  

試劑盒組成及保存 

未拆封的試劑盒可在2-8℃保存6個(gè)月；拆封后建議在1個(gè)月內(nèi)使用。

說(shuō)明：

1、所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。試劑體積以實(shí)際發(fā)貨為準(zhǔn)。相關(guān)試劑在分裝時(shí)會(huì)比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請(qǐng)?jiān)谑褂脮r(shí)量取，而非直接倒出。

試驗(yàn)所需自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

樣品收集方法: 

樣品種類繁多，建議使用參考論文中的樣本處理方法，以下羅列常規(guī)幾種樣品制備方法，僅供參考。

1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于2000prm轉(zhuǎn)速離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)內(nèi)毒素試管。

2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA鈉鹽，樣品采集后30分鐘內(nèi)于2000prm轉(zhuǎn)速離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，高血脂樣品。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M，pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融。最后將勻漿液5000prm轉(zhuǎn)速離心5-10分鐘，取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞提取液：貼壁細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，2000prm轉(zhuǎn)速離心5分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×10⁶個(gè)細(xì)胞中加入150-200μL PBS重懸，反復(fù)凍融使細(xì)胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于2000prm轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清檢測(cè)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：2000prm轉(zhuǎn)速離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。

樣品注意事項(xiàng):

    1. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融。標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

2. 試劑盒檢測(cè)范圍不等同于樣本的濃度范圍，如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議查閱文獻(xiàn)后先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。

3. 若使用化學(xué)裂解液制備組織勻漿或細(xì)胞提取液，由于引入某些化學(xué)物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致ELISA測(cè)值出現(xiàn)偏差。 

4. 某些重組蛋白可能與試劑盒中捕獲或檢測(cè)抗體不匹配而出現(xiàn)不能檢測(cè)的情況。

檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑盒及樣本從冰箱中取出后應(yīng)置室溫(25-28oC)平衡120分鐘（注意：試劑盒和樣本的平衡，非常重要，一定要平衡到足夠時(shí)間）；每次檢測(cè)后剩余試劑請(qǐng)及時(shí)置于4oC保存。

2. 配制適當(dāng)量的洗滌液：將洗滌液(20X)用雙蒸水或去離子水稀釋至1X，例如10ml洗滌液(20X)加190ml水混勻后即為1X的洗滌液。

3.檢測(cè)范圍：0.25-120 ng/ml

4. 標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)稀釋，濃度依次為：120、60、30、15、7.5、3.75 ng/mL。 

操作步驟：

1. 計(jì)算并確定一次實(shí)驗(yàn)所需的預(yù)包被板條數(shù)，取出所需板條放置在96孔框架內(nèi)，剩余微孔板放回鋁箔袋密封，保存于4oC。

2.  試劑盒和樣本在室溫下(25-28oC)平衡120min，充分平衡到室溫（注意：試劑盒和樣本的平衡，非常重要，一定要平衡到足夠時(shí)間）。

3.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔。

4.  標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

5.  樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；

6.  空白孔加入樣本稀釋液50μL；

7.  所有孔中，每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

8.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

9.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

10. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果分析：

1. 復(fù)孔的值通常在15%的差異范圍內(nèi)結(jié)果才有效，復(fù)孔平均值可作為測(cè)量值。

2. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的吸光度值應(yīng)減去本底校正孔的吸光度值(如果沒有做校正孔，則不需要減去)。

3. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，A450值為縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過(guò)樣品的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線（直線擬合）計(jì)算出樣品的相應(yīng)濃度（工作人員可提供計(jì)算軟件）。

4. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重新測(cè)定，計(jì)算濃度時(shí)需注意乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

（示意圖，僅供參考）

注意事項(xiàng)： 

1. 加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。 

2. 不能混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批試劑盒都經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。

3. 試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在22-28oC。溫度低于22oC會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。

4. 洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。