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甲型流感病毒 H1N1-2009 核酸檢測試劑盒

來源:上海研啟生物科技有限公司   2022年08月03日 10:00  

甲型流感病毒 H1N1-2009(IAV-H1-2009)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

 


【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:甲型流感病毒 H1N1-2009(IAV-H1-2009)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Influenza A virus subtype H1-2009 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

 

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測的咽拭子標(biāo)本等標(biāo)本中甲型流感病毒 H1N1-2009RNA, 適用于甲型流感病毒 H1N1-2009 感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

 

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)甲型流感病毒 H1N1-2009 特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)甲型流感病毒 H1N1-2009RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

 

【試劑組成】

 

 

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次,

有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

 

【標(biāo)本采集】

采集病人或患病動(dòng)物的咽拭子標(biāo)本,應(yīng)使用專用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位,應(yīng)避免觸及舌部;迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中,旋緊管蓋并密封, 以防干燥。

 

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

 

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

100uL 拭子標(biāo)本于1.5mL 滅菌離心管中,按RNA 提取試劑盒說明書進(jìn)行提取。

1.2 RNA 提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒離心柱提取,請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

 

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

IAV-H1-2009 反應(yīng)液

酶液

用量

20μl

1μl

 

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

 

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

 

 

 

 

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline  Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline  start (一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop (一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold  Value (上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct 值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

6. 檢測方法的局限性

樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

 

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為 100%。

檢測限:5.0×102copies/ml。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

【注意事項(xiàng)】

所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。.

 

 

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